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手把手教你液质联用仪质谱的校正

  • 小猪飞飞
    2011/07/07
  • 私聊

液质联用(LCMS)



  • 时光飞逝,新一年的原创大赛已经拉开帷幕。今年可谓事情多多,食品安全事件相继发生,相信大家可以有不少题材参与到原创大赛中来。
    我先以液质联用仪的质谱校正过程作为砖,目的是能够引出大家的玉。希望大家能够积极参与。其实,名义上是参赛,倒不如说是给自己的一个鞭策,可以让自己总结一下工作。同时又可以拿来分享,不可谓不是一件快事。之所以写这个题目的另一个原因,主要是看到不少版友还在问类似的问题。其实这些问题很简单,版友们可以耐心地看完说明书,应该也就会了。我下面的做法是我实际工作中的总结。一般较长时间关机后、长时间没有校正且发现质量数不准时,则需要进行校正。下面是主要内容,欢迎大家指正。

    1.打开名称为
    API instrumentproject。在做校正之前,注意下API instrument有没有备份。我自己的习惯是每次校正后要将API instrument进行备份,并加上校正的日期,以防备用。
    Q1 MS(Q1) neg为例,描述下质量数的校正过程。此处使用的校正溶液是PPG300032004000可以直接使用,无需稀释。
    首先,在file中打开名为Q1 NegPPG.dam的文件,出现以下界面。在图中可以看到默认的5
    个扫面质量数。



    将质荷比窗口放大,如图输入相同的参数。实际上,PPG3000中还有其他的点。理论上可以根据自身需要加入更多的点。但是有些点的响应较低,并且说明书中没有提到那些点的DP值,此处DP值可能需要自己确定,并且也没有这些点的offset值,肯能需要自己先预估一个值。此处的5个点为:44.998585.385933.6361223.8451572.097



    在上图中,还可以看到,校正时采用的是MCA模式(打钩选中),cycles设定为10

    针泵为4.6mm直径,1mL的容量,流速设定为5微升/分钟。打开针泵,点击start开始采集,得到以下的TIC图谱,要求:信号平稳,达到一定的响应值,此处为e7次方。



    TIC右边是一张质谱图。



    在上图中右键出现菜单,选择open file,出现如下图谱,该图是将5个点分开,可观察各个点的响应、半峰宽、同位素峰的分布情况。不太清楚此处同位素峰分布好坏的标准。






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  • 小猪飞飞

    第1楼2011/07/07

    点击上图中红色方框中的图标,即:calibration from spectrum,弹出以下对话框,在standard中选择PPGs Neg。右下角的对话框中显示了5个要校正的点的质量数,如果前面增加了其他的点,需要选择edit后的表格中选中所增加的点。其他的信息按图中所示输入。



    点击edit后,可看到如下表格,该表中所列出的点应该是PPG3000中的所有点。如果增加了某点,在对应的点后面打勾,并选择表格下方的更新




    点击上上图中的start,得到以下图谱。因为这是一个已经校正过了的图谱,因此,可以看到下图中最上面一块所显示的与理论值的质量偏差都在0.1以内,中间部分显示的半峰宽在0.6~0.8,最下面的部分显示的是强度变化,理论上变化值应该在15%以内。此时,无需对校正曲线进行更新或替换。




    软件还会给出一个文本,以数值的形式显示校正的结果。红色方框中显示质量数偏差在±0.1以内,半峰宽在0.6~0.8范围内。

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  • 小猪飞飞

    第2楼2011/07/07

    2.下面以Q3 NEG PPG为例,简述质量数校正的思路。

    首先,在file中打开名为Q3 NegPPG.dam的文件。扫描后发现质量数存在一定的偏差。
    下图中可以看到除第一个点外,其他点的质量数偏差均超出了0.1,中间图谱显示第三个点和第四个点的半峰宽不在0.6~0.8范围内。这些结果也可以从下下图中的红色方框内的文本看出。



    因此,此处Q3的质量数出现偏差,需要进行校正。校正主要分两步,首先是调整分辨率,软件中是通过调整offset值实现。Offset值的窗口是在调谐页面resolution选项卡中、通过点击advanced出现。下图中显示的是校正前的offset的值。本例中,需要对933.6361223.845所对应的offset值进行调谐。调谐的原则是以0.003为增加步长,即每次增加0.003。其调谐的效果是分辨率提高,即半峰宽变窄,也就是灵敏度下降,因此,offset不可设得太大。一般情况下,offset值不会变化太大。改变offset值后,需要点击下方的应用,再点击保存,此时会弹出对话卡问要不要改变,选择是,会出现另一个需要命名的对话框。此处,还将该文件命名为Q3 NEG PPG,即覆盖之前的文件。点击数据采集按钮,根据最终结果判断是否需要再次改变offset值。反复改变offset值,直至所有离子的半峰宽都在0.6~0.8范围内。此时,校正的第一步完成。给出offset最终值(右图),可以看出变化不是很大。



    给出校正后的图谱,可以看出所有图谱的半峰宽都在0.6~0.8范围内。即offset值调谐成功。



    现在可以进行校正的第二步,点击上图中的左上角的两个小图标,分别是替换、更新现有的标准曲线。此处因为没有加入其他点,因此两者都可选择。选择后弹出对话框问是否改变,选择是。此时,上图不会有任何改变。需要范围调谐页面,再次进行数据采集。

    结果如下,三张图都表明校正通过。






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  • 论坛版主招募|新窦

    第3楼2011/07/07

    很详细的校正过程,最近刚好有版友在问这个问题,这篇文章很值得参考。

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  • wufenyut

    第4楼2011/07/09

    受教了,内容很丰富,功夫很扎实,

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  • netsking

    第5楼2011/07/10

    谢谢分享,十分感谢。

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  • sunshine839

    第7楼2011/07/13

    楼主,出个WORD或PDF文档嘛,那些图片都看不清楚

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  • lr2008_ongi

    第8楼2011/07/14

    非常给力,谢谢了。

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  • season_l

    第9楼2011/07/14

    请问如何用PPG3000校正液没了,向AB购买只能买一整盒.有些浪费.请问如何用PPG3000粉末进行配制.或有AB仪器的客户可以允些

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  • wuyuandaai

    第10楼2011/07/14

    很详细,对初学的人很有用,太有心了!

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  • x-y-h

    第11楼2011/07/15

    非常好的东西 ,学习了

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