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显微摄像知识一

zhbvssong

2011/09/01

生物显微镜

第一章显微摄影的准备和观察
一．显微摄影装置
1．适合显微摄影的显微镜
(1) 照相目镜筒要能承受住显微摄影装置的重量。
(2) 通过双目镜筒，能对图象进行对焦。
(3) 使用光路选择移动杆（Optical Path Selector），能将光亮调到适合标本需要的强度。
(4) 物镜要有高分辨率和良好的平场性（整个圆形视场图象都在一个平面上）。
(5) 载物台能够移动。
(6) 聚光镜带有孔径光阑和调节光轴中心的机构。
(7) 显微镜要有视场光阑。
(8) 光源要保证有足够的亮度，可以按照观察和摄影的需要来调节光亮强度。物镜从低倍到高倍变化时，要求光亮度都能均匀。
(9) 要能够安装滤色镜。
2．适合显微摄影的显微摄影装置
(1）显微摄影装置一般有：
A. 手控曝光显微摄影装置：包括专为显微摄影用的不带镜头的镜箱。需要目测或测光表，测出光值后，先推出正确的曝光时间，再进行手控曝光。如OLYMPUS 老型号的PM-6，PM-10-35和测光表EMM-7。
B. 单镜头反光镜箱显微摄影装置。如OLYMPUS OM系列，镜箱内有内测光系统，可以自动曝光。
C. 自动曝光显微摄影专用装置。具有自动卷片、自动测光、自动控制曝光以及测量色温和倒易律失效的补偿等功能。如OLYMPUS PM-10-AD系列，PM20/30系列。
(2）显微感光记录的方式一般有：
A. 35毫米卷片照相记录。
B. 120卷片照相记录。
C. 4X5英寸，大画面单页片照相记录。
D. 31/4X41/4英寸、4X5英寸等尺寸规格的一步成象（Polaroid Film）的照相记录。
E. 16毫米的电影摄影记录。
需要注意的一点是：只要有合适的显微镜照相连接器（附有观察、取景装置），不论是生物显微镜、临床显微镜、倒置显微镜还是体视（解剖）显微镜等，都可以把适合的照相机机身或电影摄影机机身连接起来，进行观察、选视野、照相或拍电影。
（3）适合显微摄影的显微摄影装置
A. 要有能够连接显微照相机附件的装置，如35mm照相机后背或大画面底片暗盒。
B. 能按照摄影中需要的不同光亮条件进行光路调节。
C. 能够对标本不同的面积进行测光（对30%面积的平均测光，或对1%、0.1%面积的点测光）。
D. 能够把照相机附件牢固地固定在显微镜上。
E. 可连接色温测定的装置。
F. ISO/ASA感光度要有广泛的选择范围。
G. 要有倒易律失效补偿装置，可以进行长时间的自动曝光。
H. 要能够根据标本的具体情况，进行曝光量的调节。
I. 要能够进行手动曝光。
J. 要能装配特殊用途的装置，如拍16mm电影或35mm胶片的定使定格摄影（在此情况下，还应有专门的曝光控制装置）。
K. 控制器内要装有自动曝光锁机构
3．不同型号的显微摄影装置与其功能
显微摄影的装置种类甚多，从帧幅的大小，可分为135型、4”X5”或6”X9”型几种；从控制系统的操作，可分为自控、半自动及全自动控制三种类型。135型（即35mm胶片照相机）操作方便；4”X5”或6”X9”大帧幅照片操作时则较麻烦，但它拍出照片的细微结构的清晰度则优于135型；从控制系统来看，手控式较难掌握曝光时间；半自动则可测出准确的曝光时间以及光源的色温，但仍不能满足多功能的要求；高级的显微摄影系统为全自动控制，功能齐全，是研究用显微镜的理想显微摄影装置。
4．显微镜的安放与显微镜室的布置
显微镜是精密仪器，但只要正确使用，注意维护保养一般不会出现故障。用于显微摄影的显微镜更需要注意以下几点：
(1) 显微镜不要离机械设备或机器太近，也不要放置在经常有人走过的地方，以免外界的震动使底片上的图象模糊。
(2) 显微镜不要靠近窗户。因为从窗户射入的亮光影响了聚焦的准确性。
(3) 放置显微镜的工作室不要太亮，否则反射光和照明的眩光透过目镜会反射到底片上感光。
(4) 显微镜不要放置于有灰尘和肮脏的房间，并注意清洁显微镜。
5．适合显微镜摄影用的物镜与照相目镜
显微摄影需要有高分辨率、广视野平场的物镜。不论哪个厂家的显微镜，在选择显微摄影用物镜时都要注意此点。消色差物镜不适合显微摄影，它本身会引起视场图象的边缘焦点不实，而呈现模糊的现象。这是由其本身的性能引起的。如果改用平场消色差物镜就可得到全视场清晰而平坦的图象。所以在显微摄影时必须选用平场消色差物镜和平场复消色差物镜。不仅如此，显微照片的细微结构和层次的优劣，也取决于物镜的分辨率。
在进行高倍（40X）干燥系物镜的显微摄影时，最好采用带校正环物镜，因高倍干燥系物镜的成象质量与盖玻片的标准厚度有关，盖玻片的厚度不符合标准，将造成覆盖差而影响显微摄影的质量。在暗场、投射式荧光及油显微照相时，应选用带虹彩光阑的物镜，借调节光阑的大小，达到最佳的图象对比度。有些被检物体不能应用盖玻片，应选用无罩物镜。另外在进行油浸荧光显微照相时，应使用无荧光油。
照相目镜的作用是为物镜的色差、象差做光学补偿，使投射到感光底片上的图象，四周与中心都尽可能在一个焦点平面上。因此，正确选用生产厂家推荐的照相目镜，是十分重要的。
6．聚光镜的选择
聚光镜在显微摄影中的作用很大，它不仅是将光源投射来的光有效地聚焦到被检物体上，更重要的是产生与物镜相适应的光束使图象的反差和焦深处在最佳状态。这些条件的获得，是以调节聚光镜的孔径光阑从而使聚光镜的数值孔径与所用物镜数值孔径达到对应关系。根据使用的意图，可准备几种不同的聚光镜。特别在使用超低倍物镜，如1X、2X和4X时，视场边缘往往发生光亮不均匀或光亮不足的缺陷，因而必须有超低倍的聚光镜与物镜组配。
二．滤色镜在显微摄影中的作用
滤色镜又称滤光镜，它在显微镜的镜检和显微照相种的作用是不可忽视的。合理的选用滤色镜能提高图象的衬度、分辨率和增强反差；在彩色显微照相中，能调节光源的色温。
1．滤色镜的种类与功能
滤色镜为有色玻璃（或有色胶摸）制成的透明镜片。滤色镜有各种各样，种类很多，性能不一。所以，很好地了解性能，选用符合照相目的的滤色镜，是拍好照片的关键。
(1) 色温转换滤色镜　　这是在拍摄彩色照片时，为了使显微镜光源的色温与胶片本身要求的色温相符合（色温转换）而使用的滤色镜。灯光型彩色片选用LBT滤色镜，日光型彩色片选用LBD-2滤色镜。如果色温转换得不合适，就不能很好地使彩色还原。
(2) 中灰ND滤色镜（Neutral Density Filter）　　这是一种不改变色温而减少照明的光量，并能使曝光时间延长的滤色镜。ND25仅允许25%的光量透过，阻止75%的光量通过；ND50则允许50%的光量透过，阻止50%的光量通过。
(3) 反差滤色镜（绿和橙黄色）　　这是拍摄黑白照片专用的。它是为了使标本的色调与照片上的色调相一致，起着有时加强反差，有时减弱反差的作用。通常用绿滤色镜（G530）或橙滤色镜（O560）为最多。
(4) 彩色补偿滤色镜（Color Compensating Filter）　　这是为了解决彩色照相拍摄标本颜色或背景颜色不正常时作为颜色补偿用的一种滤色镜。
(5) 铷镨滤色镜（OLYMPUS 用FF表示）　　这是在拍摄彩色照片时，为了加深红颜色而使用的一种滤色镜
(6) 吸热滤色镜　　这是在拍摄生物标本时，吸收来自光源的红外线，为避免因热辐射而使生物标本（如活细胞等）死亡而使用的一种滤色镜。滤色镜本身带有一种很浅的颜色，所以在拍摄彩色照片时颜色会发生变化，需要加彩色补偿滤色镜（CC10Y或CC10M）。
2．光源的色温及色温平衡滤色镜
光源的色温，即光源的放射能，它是由波长来表现的，也就是由光的颜色来表现的。色温以“°K”作单位，是以标准黑体的绝对温度为起点，每升高1°C为1°K 。这里必须明确，在照相上光源色温的应用是指光线中所含颜色的成分，而不是指光线中冷热的温度。日光的色温为5500~6000°K，即指日光与标准黑体在5500~6000绝对温度时发出的光一样。彩色胶片在很多情况下，是以日光下进行摄影作为前提而制造出来的。换句话说，如果不与日光相同的色温进行彩色进行彩色摄影，则就不能得到正确的颜色还原。显微镜的照明光源多为低压钨丝灯和卤素灯，前者的色温为2600~3000°K，后者为3000~3400°K左右，随电压的升高，色温亦随之升高。由于钨丝灯与卤素灯的色温与日光相差很多，因此，显微摄影时必须设法把灯光的色温转换成日光的色温。通常使用两种方法：
(1) 选择功率高的照明光源如12V100W的卤素灯，以获得较接近日光的色温。
(2) 使用滤色镜改变光源的色温，用于此目的的滤色镜叫做色温转换滤色镜。
请注意，应用色温转换滤色镜，在显微摄影中非常重要。如果需要知道色温的确切数值，可通过色温计测定如OLYMPUS PM-CTR。

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dahua1981

第1楼2011/09/02

应助达人

生物显微镜很少用了现在

0

zhbvssong

第2楼2011/09/03

不过基本的功能还是需要用的，

0

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