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显微摄影技术的体验
zhbvssong
2011/09/01
私聊
生物显微镜
在形态学研究中,最终取得的照片质量,将是决定实验结果的最终依据。学术期刊编辑和审稿专家对论文的评价,也十分注重照片质量。获得一张好的照片,既取决于组织制备技术,也与显微摄影以及暗室技术有关。本文仅就显微摄影技术,以Olympus New Vanox型万能显微镜配套装置为例简要介绍如下。
1显微摄像前的准备工作
组织切片的选择:根据论文需要选择组织切片。一类为保存实验原始资料而挑选的切片,由于组织切片年久后易于褪色,所以拍成胶片代替切片,目的是便于长期保存;另一类为入选论文的核心切片,也是显微摄影的重点。在选择组织切片时,应选择切片厚度均一,展片平整,背景反差明显,透明度良好,染色质量较好的切片,不要忘记以记号笔在入选切片周围打上记号,以便于及时而准确地重复找到欲摄部位。在拍摄范围内,不应有任何污尘、组织碎片、气泡及人工假象存在,拍摄时无妨将物镜与目镜不同组合,多拍摄一些帧幅,以便选优,不与前一类切片平均使用胶卷。
选购胶卷:目前新式显微摄影装置多采用氦灯,其光路系统已由旧式钨丝照明转变成近似日光。所以选购胶卷时应为日光型者,即感光速度(ISO/ASA)为100的胶卷。其次,在挑选胶卷商品厂家时,最好对同一实验组织切片,选用同一厂家胶卷,这有利于摸索暗室洗像技术。再者,对黑白负片、彩色负片及彩色反转片(幻灯片),购买与拍摄要有计划;若以黑白片与彩色片相比,应先拍彩色片,以防组织切片放置过长褪色。如果单纯为发表论文拍摄,则只需拍摄黑白片,如果既要彩色负片又要彩色反转片,应先拍反转片。彩色反转胶卷冲洗后,一般能如实反映组织切片的真实色调,因此除可作幻灯片使用外,还可作彩卷扩印时色彩还原的标准参照。通常情况下,彩色照片扩印往往颜色失真,相同的彩卷多次扩印时色调也多不一致,而且背景常有蓝色或绿色。到照像馆扩印彩照时,应以彩色反转片或原有的相同组织相同染色方法的彩照作为参照,并建议用彩色补偿滤片(CC滤片)消掉背影杂色,使无色的背景调为纯白色。通过实践,证明经过这种处理的彩色照片质量明显提高。
正确安装胶卷:向照相机内装卷时,常出现的失误是胶卷没有挂上,致使按下自动曝光装置上的“曝光键”后,胶卷并未转动,胶片并未感光,且因一般情况下,自动曝光装置并未因胶卷未挂上有任何异常的警示,故浪费大量精力与时间。正确的装卷方法如下:打开照相机背壳,将胶卷药膜面朝内装在倒卷轴上,拉动片头至摄取卷轴端,因后者上有数条纵沟,有时须将片头剪窄,以确保片头能够插入纵沟,并且不能使片头从另一纵沟伸出来,以手指将胶片边孔套按在摄取卷轴下端的齿轮齿上,按动自动曝光装置上的“曝光”键,确实见到胶片向前卷动到摄取卷轴时,才关闭照相机背,再按动一次“曝光”键,注意倒卷轴应随着转动。
核查显微镜及其摄相装置各键钮状态:Olympus New Vanox上的键钮颇多。这里仅指出几点:
①依据胶卷上的ISO/ASA值设定胶卷速度(film speed)。
②依据胶卷品牌及型号设定倒易失效补偿值(reciprocity failure compensation),此值一般在胶卷盒上没有标明,但在各种摄相装置说明书上均可查到知名胶卷品牌的此值。
③核查摄相光路与相关各个键钮接通状态,当接通后,自动曝光装置控制面板上的“安全”灯将亮起来。
2常用显微摄影技术细节
摄影者对显微摄影装置的调整:包括两目镜瞳孔间距的调整和个人屈光不正的校正。前者指将两目镜的距离按个人的瞳孔间距进行调整,拉动目镜或捻转瞳孔间距调节螺旋。校正屈光时应转动目镜筒上的屈光度调节环,使物镜视野中心的“十”字由单线调成双线,达到完全清晰,并且左右眼应分别调整。每个拍摄者都不宜省略这一步。
物镜与摄相目镜不同组合的选择:摄影目镜除放大功能外,并不具备空间分辨功能,只有物镜才具有空间分辨力。在一般条件下,对组织切片厚度在20 μm以下者,应尽量选择较高倍物镜,例如欲放大实物50倍时,选择“20×”物镜配以“
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zhbvssong
第1楼
2011/09/04
生物显微镜还是很少人呀
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