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色谱柱老是坏,求助,给点建议

液相色谱(LC)

  • 这样的,做一难溶性药物的溶出
    溶出介质 磷酸二氢钾+磷酸二氢钠(ph6.0)
    流动相 乙腈:甲醇:水=50:40:10, 温度40,进样50ul,加了保护柱,菲罗门的
    色谱柱 月旭 xdb c18 4.6*250 5um 新的色谱柱

    一个序列运行下来,理论塔板数降低了一倍多,后来分裂,倒过来用,开头峰还行,后来分叉

    该色谱柱为新色谱柱,之前运行过一次有关物质
    色谱条件为 甲醇:乙腈:磷酸二氢钾(ph7.0) 柱温40,色谱峰还行,做完后,用10%甲醇水清洗过60分钟,在保存在乙腈

    这种情况前几天也碰到过一次,也是做完有关物质后做溶出就不行了。但这种情况以前没有发生。我推导原因如下
    第一/做完有关物质后,是否存在的甲醇水配制不好,有机相比例过高,磷酸盐未清洗完全
    第二/仪器管路不干净,尤其是缓冲盐通道长期不清洗,高比例的有机相将脏东西冲到色谱柱

    希望大家给点建议
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  • 耐士科技

    第1楼2011/09/07

    我在考虑你的柱子是否适合你的样品分析

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  • 知足常乐!

    第2楼2011/09/07

    溶出介质的浓度多大?

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  • xizhi

    第3楼2011/09/07

    不知道你磷酸盐的比例是多高,但是这种无机盐缓冲液对柱子的损害是比较大的,特别注意不要在加热条件下使用,无机盐离子长期使用会侵蚀硅胶孔壁,降低使用寿命,用过之后记得柱子冲洗完全;c18不适合经常在ph7的条件下使用,因为其硅胶基质在碱性水溶性流动相中不稳定,一般在ph2-8条件下,特别磷酸盐缓冲盐渗透力强,有加快硅胶溶解的副作用,它的存在会降低pH使用范围。。

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  • daijun828

    第4楼2011/09/07

    溶出介质就是磷酸二氢钾6g加磷酸二氢钠1g到1L水中

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  • 有水有渝

    第5楼2011/09/07

    应助达人

    相当于0.05M的浓度还不是很高了,我觉得你要进样50ul才能达到检测量,说明溶出时辅料占的比例也不小,可能是辅料污染了色谱柱头,分叉的同时压力有在升高吗?

    daijun828(daijun828) 发表:溶出介质就是磷酸二氢钾6g加磷酸二氢钠1g到1L水中

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  • fony

    第6楼2011/09/07

    期待月旭的工程师来解答,我们也学习一下

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  • xiaoyuansh

    第7楼2011/09/08

    感觉可以到月旭版面发个帖讨论下,他们对自己的柱可能有更多的发言权。

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  • Longer

    第9楼2011/09/09

    磷酸盐是很伤柱子的,伤不起啊,伤不起。
    看了你的条件柱子反过来还能用,是不是盐与固定相结合,然后盐有析出啊,用柱温箱,温度高点试试。

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  • suiniubei

    第10楼2011/09/09

    前处理怎么做的?这个很重要。

     另外,你的磷酸盐浓度过高,已达50mmol/L.一般用10~30mmol/L.

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  • zhaohua8011

    第11楼2011/09/11

    长期使用较大进样量和不及时冲洗色谱柱都会降低色谱柱寿命!

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