液相色谱柱维护之正向使用、反向冲洗

液相色谱柱维护之正向使用、反向冲洗

前言：
液相色谱柱是比较昂贵的色谱耗材，正确的使用和维护对发挥色谱柱的最佳性能和延长寿命至关重要。对于新柱的首次使用要平衡活化、按照标签标示的方向使用、保证流动相和样品洁净、在规定pH范围使用等使用注意事项本文就不在此一一赘述，今天我们主要来讨论一下其维护方法。
关键词：
色谱柱、维护、柱压、塌陷、冲洗、反向
正文：
色谱柱维护是个长期复杂的工作，如果维护得当会得到满意的试验结果，即提高了工作效率，又延长了色谱柱寿命、节约成本。分析色谱柱受损伤的因素发现，填料被污染是最常见的问题。而解决这个问题最有效、方便、省钱的办法就是冲洗色谱柱。现在以大家应用最为常见的硅胶基质键合C18填料的色谱柱为例，如果您的色谱柱前后端筛板是相同的，那么，本文给您的这个建议对您的色谱柱维护将非常实用，即：正向使用、方向冲洗！

色谱柱正常的工作状态即流动相在泵的外力下带着样品流入色谱柱，然后在柱内把样品分离，而后流出色谱柱进入检测器（如下图一）。
图一

看似简单的过程却会由于流动相、样品的洁净度不够等原因把污染物带入色谱柱（如下图二），也就是说色谱柱本身的使用就是一个被污染的过程，随着时间越来越长，污染越来越来重，直到报废。
图二

色谱柱最先被污染的部位就是柱前段，即使是添加保护柱或在线过滤器，也只能减少污染，而并不能杜绝污染。随着使用时间的延长，色谱柱长期接受来自一个方向的污染和冲击，会带来两个严重后果：
一是柱前段被高度污染，柱压升高等；
二是色谱柱头填料塌陷，即由于色谱柱头填料长期接受来自同一个方向的力量冲击造成的松懈，如果不及时修复会来到柱效下降、峰型变差甚至分叉等情况（如下图三）。
图三

被污染后得到的试验图谱自然不合我们的要求，如下图四为某样品在柱前段被污染的色谱柱中检测得到的图谱，理论塔板数、拖尾因子都明显下降，并不符合规定。
图四

我们解决这个污染的办法就是冲洗色谱柱，如果您怕麻烦采用正向冲洗，很显然，根据污染物被流动相带出的方向看，污染物会进过整个柱管内的填料，因此这对色谱柱来说又是一次污染的过程。因此我在这里给您的建议是反向冲洗，使污染物经过最小的路线流出色谱柱（如下图五）。如果您在平时试验中使用此方法，不但能快速的把柱前段的污染物冲洗走，还能把由于流动相冲击照成的柱头填料塌陷修复好，并且采用此方法越早对柱子的修复率越高，色谱柱性能也能保持的越长久。
图五

经过反向冲洗后，对某样品同样方法检测，图谱明显变好（见下图六）塔板数、拖尾因子都恢复到原来水平。
图六

为保证反向冲洗时二次污染色谱柱，大家一定要保证色谱柱前端的管路、流动相等的洁净度。如不能保证流动相的纯度，建议使用前抽滤。因此，此种方法对于色谱柱的日常维护效果明显，值得大家借鉴！也欢迎大家共同讨论，发表自己看法！