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【极限体验】RP-HPLC保留时间和TLC之Rf值比较(11月份)

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    2011/11/27
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厂商论坛

  • 【发贴背景】
    由冰雨开贴讨论的出峰顺序问题
    链接：    http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20111125/3668165/
    我选了两个典型的化合物，下面要对它们的TLC行为和HPLC行为进行比较。

    【化合物结构】
    这两个化合物在以前的体验贴中，曾多次亮相，呵呵。
    第一个是环烯醚萜类化合物（就叫X吧）。

    一个是西红花苷类化合物（就叫Y吧）。

    【仪器试剂】
    水：重蒸水
    甲醇：    色谱纯，天津大茂
    HPLC：SHIMADZU LC-10AT、SHIMADZU SPD-10A

    【色谱条件】
    色谱柱：Ultimate XB-C18柱（5μm, 4.6x250mm）
    流动相：甲醇/水（V：V），梯度洗脱
    起始浓度：30%；梯度：30min--60%
    流速：1.0ml/min
    柱温：柱温箱25度

    【TLC比较】
    首先进行TLC比较，展开剂为氯仿/甲醇/乙酸＝2：1：0.01
    实验结果表明：化合物X的Rf较大，化合物Y的Rf值较小
    传统意义上，可以理解成：相对于化合物Y，化合物X的极性较小


    【HPLC比较】
    理论上来说，应该是化合物X的出峰时间比化合物Y的出峰时间晚
    可以实际的结果是，化合物X的出峰时候比化合物Y的出峰时间早很多
    第一张为化合物X的HPLC色谱行为图，保留时间12min
    注：10多分钟就出峰了，实在没心情继续再白跑几十分钟了，就停止采集了


    这是化合物Y的HPLC色谱行为图，    保留时间34min


    【小结与讨论】
    1. 不能简单地依据TLC的Rf值或者HPLC的保留时间来判断化合物的极性大小，相反，依据化合物的极性大小来推测TLC的Rf值或者HPLC的保留时间，有时候也行不通，比如文中提到的两个化合物。实际经验告诉我们，TLC的Rf值或者HPLC的保留时间，这二者没有必然的联系，仅作参考。

    2. 类似的情况很多，比如有些样品，在用正相（TLC）或者用HPLC的时候，都表现出很强的死吸附。为什么？其实很简单，TLC和HPLC这个过程很复杂（说复杂就意味着，你不要细问，因为具体的我也说不上来），涉及很多其它作用力，是一种综合作用的结果

    3. 大家慢慢讨论吧，很多师弟师妹问我这个问题，我从来都是说：Rf值跟保留时间的关系，不是绝对的，仅供参考。
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    第1楼2011/11/27

    楼层备用。

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    第2楼2011/11/27

    下篇体验：同一样品，在不同色谱柱上保留时间的比较
    好像这个已经发过体验了还是？汗。。

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  • 冷冷的冰雨

    第3楼2011/11/27

    赞同kiakia的观点

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  • dahua1981

    第4楼2011/11/28

    应助达人

    这篇文章的灵感kaikai还是受冰雨的启发啊

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  • fengmo4668

    第5楼2011/11/28

    也就是说，大闸蟹或者礼品应该分冰雨一半？？

    dahua1981(dahua1981) 发表:这篇文章的灵感kaikai还是受冰雨的启发啊

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  • fengmo4668

    第6楼2011/11/28

    另外，窃以为，kaikai的TLC所用展开剂和液相所用流动相相差太远（配比和种类），不具有可比较性。
    如风、马、牛者。

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    第7楼2011/11/28

    NO，以前就想发的，觉得太简单
    冰雨的贴子，算导火索

    dahua1981(dahua1981) 发表:这篇文章的灵感kaikai还是受冰雨的启发啊

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    第8楼2011/11/28

    现在大闸蟹成通用货币了啊？

    fengmo4668(fengmo4668) 发表:也就是说，大闸蟹或者礼品应该分冰雨一半？？

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    第9楼2011/11/28

    因为TLC跟HPLC本身这二者就没有必然的联系
    我贴子也是这么表达的，所以，风马牛不相及只是另一种诠释

    fengmo4668(fengmo4668) 发表:另外，窃以为，kaikai的TLC所用展开剂和液相所用流动相相差太远（配比和种类），不具有可比较性。
    如风、马、牛者。

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  • fengmo4668

    第10楼2011/11/28

    关键是极限体验会送大闸蟹的嘛。

    头像更新中，请稍候…(kaikaifeng) 发表:现在大闸蟹成通用货币了啊？

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