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酶标仪的校准

职业游民

2011/12/31

仪器检定/校准/计量

本文主要从酶标仪的几个测量参数出发，再结合酶标仪的测量系统的几个关键部件，讨论测量得到数据出现问题时，可以通过调整那些部件尽量得到合格的测量值；
在酶标仪的结构上有不清楚的，可以参考本人第三届原创大赛作品
【第三届原创大赛】酶标仪的内部结构、故障判断以及排除

测量原理：酶标仪的测量原理与紫外分光光度计一样，都是采用朗伯比尔定律；不过一般的酶标仪都是采用滤光片获取单色光【紫外分光光度计一般采用菱镜或者光栅】，关于如何获得每孔的光密度值一致，在后面将有介绍；线性相关性、重复性是很重要的，为此还需要稳定的测量溶液【标准板一般人都没有，所以选用了重铬酸钾的稀硫酸溶液】；

测量方法与数据
设备准备：两台酶标仪【最好有一台是鉴定合格的，一台是备用的，本次使用的两台新仪器，有一台已经鉴定合格】，含板孔的酶标板两块；
试剂：重铬酸钾【分析纯】，硫酸【分析纯】，去离子水

试剂配制：
硫酸配制：取2.7ml浓硫酸加入到去离子水中，【一边加入硫酸，一边搅拌，顺序不可颠倒，否则很危险】冷却后定容到1L备用
浓度一：称取0.35g重铬酸钾固体，加入到100ml硫酸溶液中溶解；
浓度二：取20ml浓度一的溶液，加入到20ml硫酸溶液中混匀；
浓度三：取10ml浓度一的溶液，加入到30ml硫酸溶解中混匀
浓度四：取5ml浓度一的溶液，加入到35ml硫酸溶液中混匀
浓度五：取2.5ml浓度一的溶液，加入到37.5ml硫酸溶液中混匀
浓度六：直接用硫酸溶液即可

测量模块
每个孔中加入200ul溶液，具体的溶液如下
板一
第一、二列为浓度六溶液，第三、四列为浓度五的溶液，以此类推布满整个板
板二
选用浓度二的溶液，布满整个板

每个空中加入200ul

数据讲解
首先使用板一进行两次间隔性，首次测定数据如下【8*12模块】

间隔三个小时后进行第二次测定，得到的数据如下

完成第二次测定以后，将该板转移到另一台经过第三方机构鉴定过的酶标仪上进行测定，数据如下；

数据处理，经过计算，得到如下这个数值，并用Excel做了处理，得到相应的相关系数，乃至曲线公式
首次测定

二次测定

对比测定数值

用板二测定得到如下数值，只要是测定横排的变异系数，最后还做了一下大概的不确定度计算，2.8%的整板变异，还算行吧；

这就是大名顶顶的检测器，可一次完成八孔测定，整版完成需要十二次测定，一旦污染，板一测定过程中得到的CV%将变得很大；所以板一测得数据的CV很大时，可以检查一下这个地方是不是被污染了；

下图就是已经变成单色光以后的光源，一个八个，对应上图的八个检测器，它采用了光纤传导技术，即一束经过了滤光片的光束照在很多根光纤上，每根光纤射入的光能量基本相同，再将这些光纤从数量上分为均一的8股，每股对应下图的一个光源，从而尽可能的保证每个光源的能量一致；板一的CV太大时也需要对此进行检查；

光源与检测器【背面】的相对位置，已经部分检测器的电路原件；

光源的旁边是一个定位用的感应器，用于定位；两个螺丝用于调整板孔停留的位置，不能乱动，只有在发现吸光度值均明显与标准酶标仪吸光度不同时，并且换过钨灯无效的情况下，再对此进行核查校准【一般情况下不动为好】

下图是板孔定位器，配套上图的感应器使用；图中的每个空代表一个停留点一个十二个位置，也就是每列孔停留测定定位；当板二的CV较大时，大家可以看看是不是这个定位卡条被损坏；
有时候酶标仪报错显示“酶标板错误”时，也有可能是定位感应器被异物堵塞了感应不上

下图为酶标仪的外观图，这张图片是老图片了，大家可以在我去年的一篇原创中看到更对的酶标仪图片

说道这里，很对的点已经差不多了，在此还有需要做一些说明
1、Excel在处理线性系数的时候，0.999以上的直接被显示为1，这个已经通过第三方软件测试
2、两台酶标仪时新仪器，两者的差异很小，数据接近，但时间太紧，用了一些去年的老图片上传了，不过结构完全一致的；
3、选用重铬酸钾硫酸溶液的原因主要是应为它稳定，重复性测试的误差值相对更加真实一些；
4、仪器的检验校准是一件很大的事情，所以我们不仅要知道所以然，还要知道其所以然【现象和原理都要知道】；

最后，希望以后大家在写这类的时候，也把所有的东西都写进去，更加便于学习和处理存在的问题，当然上述提到的可能会有很多问题，希望大家提出意见一起讨论，一起学习；

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tangtang

第1楼2011/12/31

这个相关系数真是绝了。

0

穿越时空

第2楼2012/01/04

楼主动手能力强呀。

0

职业游民

第3楼2012/01/06

二楼的同志，不是线性系数绝，是Excel很绝，呵呵

0

职业游民

第4楼2012/01/07

回复板凳，这都是被逼迫出来的，唉

0

garnet

第5楼2012/01/18

这篇东西非常有用，收下了。
另外回复楼主，excel不是相关系数0.999以后就是1的，这是因为你没有设置好小数的位数。在设置趋势线标签格式那里，把数字那一项设置为“数字”，小数位数4位，就会显示0.999x了

0

职业游民

第6楼2012/01/18

谢谢五楼的，呵呵

0

加菲尔德

第7楼2014/08/29

很实用楼主辛苦收藏学习了

0

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