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【极限体验】一次可怕的耐用性试验(12月份)

东风恶

2011/12/31

私聊

厂商论坛

终于放假了！
由于现在药品质量研究中要求更多了，如色谱条件的耐用性等。试验多了，资料也难整理了。。。
色谱柱：SN:W10212097，PN:Wel518415
SN:W11212203，PN:Wel518415，LN:W1811.02

色谱条件：
取装量差异项下的内容物适量，精密称定，用磷酸盐缓冲液（0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-甲醇-乙腈（550:200:250）溶液溶解并稀释制成每1ml中约含阿莫西林2mg/ml的溶液，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml置100ml量瓶中，用磷酸盐缓冲液溶液稀释至刻度，作为对照溶液。照高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录V D）测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为0.1mol/L磷酸二氢钾溶液-0.018mol/L十二烷基硫酸钠-甲醇-乙腈（275:275:200:250），用磷酸调节pH值至2.0；流动相B为乙腈；流速为每分钟1.0ml；检测波长为225nm。以下表进行线性梯度洗脱。理论板数按阿莫西林峰计算不低于3000。取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的20%～25%。再精密量取供试品溶液和对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液阿莫西林主峰面积（1.0%），各杂质峰面积的和不得大于对照溶液阿莫西林主峰面积的3倍（3.0%）。（供试品溶液中任何小于对照溶液主峰面积0.05倍的峰可忽略不计）。

时间（分钟）	流动相A（%）	流动相B（%）
0	95	5
5	90	10
15	70	30
20	70	30
25	95	5
35	95	5

耐用性试验结果汇总

耐用性研究项目		试验方法的条件	确认的耐用性范围
流动相	流动相B（含水情况）	比例为95:5（乙腈-水）	应控制水分
	流动相A组分pH值变化	pH值：1.8、2.0、2.2	±0.2
	流动相A磷酸盐浓度	0.095～0.105mol/L	0.10±0.005mol/L
	流动相A SDS浓度	0.0171～0.0189mol/L	0.018±0.009mol/L
	流动相A组分比例	每个组分±5%变化	每个组分±5%变化
流速（活性成分的保留时间变化）		0.95～1.20ml/min	1.0±0.05ml/min
色谱柱温度		室温	无相关研究
检测波长		225nm	220nm～225nm

（1）检测波长变化±5nm，试验结果见下图表。

试验结果色谱图（225nm±5nm）

225±5nm有关物质检查结果

波长（nm）	峰面积归一化法（%）	阿莫西林峰面积	双氯西林钠峰面积
225nm	98.346	2973049	2070214
220nm	98.063	2954675	2323686
230nm	98.854	2963646	1360435

试验结果表明，检测波长波动对双氯西林钠的检测响应值有较大影响，在220nm～225nm之间波动，影响较小；阿莫西林检测响应值影响较小。
备注：色谱图从上至下顺序分别为：样品（225nm）、样品1（220nm）、样品2（230nm）。

（2）流速变化，试验结果见下图表。

流速变化试验结果色谱图

备注：色谱图从上至下顺序分别为：样品（1.0ml/min）、样品3（0.95ml/min）、样品4（1.05ml/min）、样品5（流速1.25ml/min）。

流速变化试验结果

流速（ml/min）	两成分主峰分离度
1.0	3.939/5.797
0.95	3.963/5.550
1.05	3.897/5.597
1.25	3.617/3.627

试验结果表明，流速波动对两组份主峰分离度无影响，均大于1.5；流速增加应考虑溶剂峰的影响。

（3）流动相B比例变化，试验结果见下图表。

流动相B比例变化试验结果色谱图

备注：色谱图从上至下顺序分别为：样品、样品6（流动相B：乙腈-水）

流动相B比例变化试验结果

流动相B	两组份主峰分离度	理论板数
乙腈：水（100:0）	3.939/5.797	2388/10265
乙腈：水（95:5）	5.700/3.399	2736/5736

试验结果表明，流动相B与水比例变化对双氯西林钠的检测响应值有较大影响，在配制流动相B时应控制水分。

（4）流动相B组分pH值变化，试验结果见下图表。

流动相组分比例变化试验结果色谱图

备注：色谱图从上至下顺序分别为：样品（pH值2.0）、样品7（pH值1.8）、样品8（pH值2.2）。

流动相B组分pH值变化试验结果

pH值	两组份主峰分离度
2.0	3.939/5.797
1.8	3.752/3.616
2.2	4.979/2.282

试验结果表明，pH值变化±0.2，两组份主峰分离度无影响。

（5）流动相组分A磷酸盐浓度变化，试验结果见下图表。

流动相组分A磷酸盐浓度变化试验结果色谱图

备注：色谱图从上至下顺序分别为：样品（0.1mol/L磷酸二氢钾溶液）、样品9（0.095mol/L磷酸二氢钾溶液）、样品10（0.105mol/L磷酸二氢钾溶液）。

流动相组分A磷酸盐浓度变化试验结果

磷酸二氢钾浓度（mol/L）	两组份主峰分离度
0.1	3.939/5.797
0.095	5.948/2.412
0.105	4.510/2.970

试验结果表明，流动相组分A磷酸盐浓度变化±0.05，两组份主峰分离度无影响。

（6）流动相组分A十二烷基硫酸钠浓度变化，试验结果见下图表。

十二烷基硫酸钠浓度变化试验结果色谱图

备注：色谱图从上至下顺序分别为：样品（0.018mol/L）、样品11（0.0171mol/L）、样品12（0.0189mol/L）。

十二烷基硫酸钠（SDS）变化试验结果

十二烷基硫酸钠浓度（mol/L）	两组份主峰分离度
0.018	3.939/5.797
0.0171	4.941/6.185
0.0189	4.731/6.587

试验结果表明，流动相组分A十二烷基硫酸钠浓度变化±0.009，两组份主峰分离度无影响。

（7）流动相B组分比例变化，试验结果见下图表。

流动相B主峰比例变化试验结果色谱图

备注：色谱图从上至下顺序分别为：样品、样品13～20。

流动相B组分比例变化试验结果

样品序号	KH₂PO₄：SDS：甲醇：乙腈	两组份主峰分离度
13	262:275:200:250	4.115/6418
14	289:275:200:250	4.253/3.332
15	275:262:200:250	4.127/6.618
16	275:289:200:250	4.424/6.476
17	275:275:190:250	4.795/4.778
18	275:275:210:250	4.312/5.960
19	275:275:200:238	4.920/1.598
20	275:275:200:262	4.652/5.468

精
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私聊

tangtang

第1楼2011/12/31

想看看如何可怕法。

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私聊

东风恶

第2楼2011/12/31

谢谢您的关注！
祝您新年快乐！
tangtang(tangtang) 发表:想看看如何可怕法。

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私聊

tangtang

第3楼2011/12/31

2011年最后一天了，您还在辛苦发原创，佩服啊。

原来可怕是说所有的影响因素都要研究啊。

药典规定允许一定范围的调整，这个范围也要用数据来证明吗？
东风恶(luoleqc) 发表:谢谢您的关注！
祝您新年快乐！

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私聊

东风恶

第4楼2011/12/31

是的，还有选用三家以上主流品牌的色谱柱进行。很多试验的，我没有写完。

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私聊

冷冷的冰雨

第5楼2012/01/01

2011最后一篇啊
作品内容很给了

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私聊

fengmo4668

第6楼2012/01/01

你的的流速变化试验中，
流速调大，保留时间缩短可以理解，
可是，你把流速调整到0.95ml/min，保留时间也缩短了怎么解释呢？
（2）流速变化，试验结果见下图表。

备注：色谱图从上至下顺序分别为：样品（1.0ml/min）、样品3（0.95ml/min）、样品4（1.05ml/min）、样品5（流速1.25ml/min）。