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样品或标样重现性不好的原因及解决方法

Eda

2012/02/24

样品或者标品的重现性不好，下面本人根据自己的经验把原因和处理方式给大家分享一下。不要笼统说重现性不好，要细分两种情况：单独样品重现性不好;样品和标品的重现性不好。

(一)如果单是样品的重现性不好而标品的重现性可以的话，原因比较容易分析。问题可能出现在样品本身上。

1)样品降解或者分解，当你的样品在稀释液中不稳定，这种情况是很有可能发生的。解决办法：改变稀释溶液，要是遇水分解的流动相中不能有水，必要时还等改用正向色谱。

2)样品溶解时间不足。比如当你进第一针时候假设样品溶解率为90%，后一针为95%，以后随着时间延长而增加，这样你重现性肯定不好。这种情况的判定比较简单，不要肉眼看容量品是否有不容物，你的眼睛没有那么高的分辨率，只要把容量瓶超声一下，看看超声前后的对比就可以判断。如果是这种问题，解决方法简单，在处理样品时加入少量的易容溶剂，超声5秒左右，再用你的稀释液定容，一般就可以解决。

3)样品称量问题。当你做同一容量瓶的样品取得很好的重现，而在同一样品不同容量瓶中存在重现不好的情况。可能就是你的称量中出了问题。具体哪里的问题，我没有肯定的答案，但是可以肯定的是，你必须要重新称量，并复检，按着要求。可是要加倍复检的，所以每次称量你都必须小心。此外，还可能是容量瓶本身不准，不过这个可能性比较小，建议用 100ml容量瓶。因为容量瓶越小误差越大，这点我做过验证的，在国内可以作为“真理”。真理就不要在耗时费事验证了。

(二)样品和标准品同时出现重现性不好的情况。

这种情况比上一种可能要稍微复杂一些。但是也比较好分析。

首先，不要笼统说重现性不好。也有两种情况，一是保留时间较好，只是响应值不好;二是两者都不好。

如果是第一种情况，请参考(一)中的分析，这里不赘述。

如果保留时间和响应值都不好可能的原因如下：

1)柱温的影响。柱子温度和保留时间的关系，一般是反向的，即柱温越高保留时间越短，反之亦然。但是柱温不仅会对保留时间有影响，还会影响响应值也就是峰面积。一般来讲保留时间提起会使峰宽变小和峰高变大，但他们两者的对于峰面积的作用一般不会正好抵消，也就是说面积有所变化的。所以，柱温箱是必要的。如果你还没有赶快和老板说，如果不给买，就说是我说的。哈哈!

2)流速和柱压的问题。首先要知道在液相色谱中是用流速控制柱压的，流速你要设定的，而柱压是配合你的流速仪器自行控制的。柱压是流速的因，流速是柱压的果。当你系统正常运行时突然柱压降低，这个时候流速会突然降低，样品的保留时间会延后，当然也就造成重现性的不好了。还有柱压波动较大的时候，也不会有好的重现性(保留时间和响应值)。

3)其他比较少见的情况。灯的能量不足。表现为，保留时间可以，但是响应值逐渐降低。解决办法：换灯。说实在的这种情况比较少见，至少我没有遇到过。有些色友在分析类似的问题时上来就说人家的灯可能不行了，我觉得这是很站不住脚的一种说法。首先氘灯的平均使用寿命为3000小时，每天8小时的话可以用375天(一年半使用时间)，也就是说这种情况如果成立的可能性为1/375，而且未必成立。其次，一般仪器开机时都有自检的(国产仪器我不清楚，至少waters和agilent是有的)，自检通过了一般工作1天是一点问题都没有的。我曾经在自检初次通不过情况下使用半月也没有问题(一次不通过，关机，停一会再开机)。第三，我认为灯能量的衰减速度是随着你灯能量降低而降低的。这个是我个人的观点。好比100元的股票每天跌10%，第一天下跌10元，第十天下跌多少我就不算了，反正比10元少很多。扯远了，这个观点套用到这里就是，灯的能量低事实，不支持短短一天时间内重现性不好这个现象，也可以近似说等能量低与检测重现性不好无关。看似比较矛盾，我的论据在反对我的论点。但是我想这就是我的态度，因为这种情况我没有遇到过，而我推论也仅仅是推论，加之有的色友一再强调，未免心虚，故而矛盾一把吧。

结束语，如果你遇到的问题用我提供的思路解决了，那么祝贺你。如果解决不了也不要骂我，说我误导你浪费你的时间，其实有些时候你遇到的问题不是单一一个原因造成了，需要综合考虑，并解决。

--转自分析测试百科

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yuduoling

第1楼2012/02/24

一般标样重现性很少出现不好

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