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[基本原理] 超声破碎的原理

  • 省部重点实验室
    2012/02/24
  • 私聊

生命科学仪器综合讨论

  • 超声破碎的原理
    超声波是物质介质中的一种弹性机械波,它既是一种波动形式,又是一种能量形式。超声对细胞的作用主要有热效应,空化效应和机械效应。热效应是当超声在介质中传播时,摩擦力阻碍了由超声引起的分子震动,使部分能量转化为局部高热(4243)。空化效应是在超声照射下,生物体内形成空泡,随着空泡震动和其猛烈的聚爆而产生出机械剪切压力和动荡。另外,空化泡破裂时产生瞬时高温(约5000)、高压(可达500×104Pa),可使水蒸气热解离产生.OH自由基和.H原子,由.OH自由基和.H原子引起的氧化还原反应可导致多聚物降解、酶失活、脂质过氧化和细胞杀伤。机械效应是超声的原发效应,超声波在传播过程中介质质点交替地压缩与伸张构成了压力变化,引起细胞结构损伤。损伤作用的强弱与超声的频率和强度密切相关。所以如果使用玻璃管,可能会碎裂,而通常使用的是塑料试管。







    1、大肠杆菌表达外源蛋白,在超声破碎的时候,用含有1%triton-X-100PBS悬浮,然后超声的效果较好,1%triton-X-100的作用还是很明显的,对其他的一些细菌同样起作用,比如链霉菌。
    2
    3、酵母破碎的问题
    /
    a
    、一般的PROTOCOL都是用glass beads,破碎酵母细胞sigma G-8772 酵母破碎效果好的我所做过的方法中还是玻璃珠,效率很高,而且对目的蛋白活性不会有什么影响。一般应该用这个方法。

    b
    、化学裂解的方法,10g酵母 1ml的乙酸乙酯,充分搅拌至液体状。此法的裂解效果不错的。加尿素裂解液(尿素8mol/L, NaCl 0.5mol/L,Tris 20mmol/L, EDTA 20mmol/L, 2%SDS, PH8.0),据说效果可以

    c、毕氏酵母细胞破碎法
    文献上的方法: The pelleted cells were resuspended in 200 ll 1±8 M NaOH, 1±2 M b-mercaptoethanol, and incubated for 5 min on ice. After addition of 200 ll 10%TCA, the mixture was incubated for 5 min, centrifuged, and the pellet was resuspended in 50 ll 2?SDS-PAGE loading buffer and neutralized at pH 7±0 by adding 5±10 ll 1 M Tris base. The samples were heated to 95 °C for 3 min before loading onto SDS-PAGE gels (12% acrylamide). 若是想得到胞内蛋白可以用蜗牛酶处理,效果比较好!

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  • yuduoling

    第1楼2012/02/25

    这个原理又复习了一下

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