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固相萃取条件优化

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  • 最近在郑州出差,在客户那里做固相萃取--HPLC,处理柴胡样品。对比了几个厂家的固相萃取柱,以及验证了全自动固相萃取仪器平行性。客户想了解固相萃取条件的优化,下面分享一下:

    优化固相萃取参数

    在建立了初步的固相萃取方法后就可以用空白样品添加目标化合物后对添加物进行萃取。然后,根据分析结果对初步的固相萃取方法进行优化,以达到最佳的效果。优化过程主要考虑的因素有:

    回收率是否达到检测要求?
    能否将萃取过程缩短以提高效率?
    能否将溶剂使用量减少以节省成本、提高效率、减少污染?

    如果检测结果发现回收率较低,应该首先检查整个操作过程是否有错。如果没有,就要从方法本身查找原因了。可以从以下几个方面着手检查:

    1、 洗涤溶剂是否合适
    理想的洗涤溶剂是溶于基质,但对目标物溶解度低。
    2、目标化合物是否没有完全洗脱
    选择更强的洗脱溶剂(如改变pH、离子强度、有机溶剂%含量)
    选择作用力相对较弱的SPE柱
    3、目标化合物是否没有被完全吸附
    可以采用原萃取方法以双柱叠加的方式将两个性质相同的固相萃取柱串连在一起进行柱 子预处理及样品添加操作,然后将两根柱子分开,分别对两根萃取柱洗脱。如果在下方的柱子上发现有目标化合物就表明目标化合物在萃取过程发生了穿透。也就是说目标化合物在样品添加过秤中没有按照方法设计要求不很好地吸附。有部分目标化合物在样品添加过程中随样品基质穿过固相萃取柱。发生穿透的原因可能是:萃取机理选择的不合适;固相萃取柱的吸附容量不够。目标化合物没有被完全吸附还有另外一种可能性就是对于某些样品来说,由于部分目标化合物没有呈游离状态。如生物样品中的目标化合物与蛋白质结合在一起,所以随着样品基质通过固相萃取柱。
    4、目标化合物与固相萃取填料功能团之间的吸附作用过强
    洗脱溶剂的洗脱强度不足以将目标化合物全部洗脱下来。这种情况可以改用吸附力较弱 的固相萃取柱或改用洗脱强度更大地溶剂进行洗脱。

    在达到预期回收率的前提下,我们希望萃取过程越短越好。提高效率可以从以下几个方面入手:
    1、提高流速。包括预处理溶液流速、样品过柱流速。
    2、减少洗脱溶液的体积

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  • zjzy

    第1楼2012/03/06

    实践出真知,楼主加油,感谢分享,学习学习

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  • yigaozizi

    第2楼2012/03/07

    楼主请教个问题,活化SPE柱的溶剂选择原则是什么?

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  • xiongbb

    第3楼2012/03/07

    首先活化的目的:

    1、清洗spe柱
    2、激活spe柱填料活性基团
    3、给上样提供一个良好的环境

    接下来原则:

    1、活化溶剂可以是单一,也可是多种,能达到以上3个目的即可;
    2、活化溶剂不可以带入新的杂质;
    3、活化溶剂不可以使样品变质;
    4、活化溶剂尽量选择毒性小,成本低的溶剂;
    5、如果有条件,尽量选择色谱纯;

    yigaozizi(yigaozizi) 发表:楼主请教个问题,活化SPE柱的溶剂选择原则是什么?

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  • 爱涂涂

    第4楼2012/03/07

    优化过程中要考虑:重现性吗?对固相萃取不太懂,请教一下楼主

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  • xiongbb

    第5楼2012/03/07

    重现性是固相萃取一个很重要的指标,只有重现性好了才谈的上固相萃取条件稳定。才谈得上优化条件。

    所有优化过程中发现重现性变差,说明条件不合适了。

    yuzhh(yuzhh) 发表:优化过程中要考虑:重现性吗?对固相萃取不太懂,请教一下楼主

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  • sally0326

    第6楼2012/03/08

    “1、 洗涤溶剂是否合适
    理想的洗涤溶剂是溶于基质,但对目标物溶解度低。”

    溶于基质??嘛意思,没看懂。不懂固相萃取,最近学习来着,所以不知道这里指的基质是指固相萃取填料么?如果是的话,怎么洗涤溶剂溶于基质呢?求解

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  • xiongbb

    第7楼2012/03/08

    不是指填料。基质就是指目标物所在的环境。举个例子,奶粉里面添加三聚氰胺,最后用各种溶剂提取,提取后的,上样过柱子。上样液就是基质,三聚氰胺是目标物。

    sally0326(sally0326) 发表:“1、 洗涤溶剂是否合适
    理想的洗涤溶剂是溶于基质,但对目标物溶解度低。”

    溶于基质??嘛意思,没看懂。不懂固相萃取,最近学习来着,所以不知道这里指的基质是指固相萃取填料么?如果是的话,怎么洗涤溶剂溶于基质呢?求解

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  • sally0326

    第8楼2012/03/09

    哦~~明白了,谢谢楼主!

    xiongbb(xiongbb) 发表:不是指填料。基质就是指目标物所在的环境。举个例子,奶粉里面添加三聚氰胺,最后用各种溶剂提取,提取后的,上样过柱子。上样液就是基质,三聚氰胺是目标物。

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  • wxlsdyt

    第9楼2012/03/10

    重现性对实验时很重要,但如何测定柱子的重现性是否可以接受呢?

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  • xiongbb

    第10楼2012/03/10

    如果抛开实验单纯考虑柱子的重现性考察的指标比较多:

    1、流速;
    2、颗粒度;
    3、柱床;
    4、载样量;

    当然面对实验,最直接的就是看回收率。考察重现性很容易,不同批次样品,不同批次柱子去考察回收率。算rsd值。<2认为重现性可以接受。

    wxlsdyt(wxlsdyt) 发表:重现性对实验时很重要,但如何测定柱子的重现性是否可以接受呢?

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