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请教一个关于用毛细管电泳看蛋白和核酸的结合的问题

  • ZZmOsquitO
    2012/03/10
    • 私聊

毛细管电泳（CE）

  • 我现在在做蛋白和核酸的结合.我的蛋白和核酸可以结合. 蛋白是400多KDa的 核酸很小, 是30bp的dsDNA.

    我现在的检测条件下只跑蛋白是可以跑出来的, 当我蛋白和核酸一起跑的时候, 也会在跟只跑蛋白在差不多的位置出峰. (我用的双波长检测,蛋白和核酸分别标记,所以都能看到.)

    问题就是,
    一起跑的时候, 出的所有峰, 都是既有蛋白又有核酸, 不管我加的比例是多少.
    我就很困惑. 如果我加的核酸量很小的话,不是应该有很多游离的蛋白吗,就是说应该有的蛋白峰对应的地方是没有核酸出峰才对的啊, 为什么没有这样的峰呢, 我什么地方理解错了吗?~
    请大家帮忙.谢谢~~~~!

    BTW， 我用的是bare fused silica capillary， 是CZE， 不是凝胶的 谢谢~~~
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  • ZZmOsquitO

    第1楼2012/03/12

    大家帮帮忙呀~~谢谢~~~~·

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  • nini2006

    第2楼2012/03/12

    你用的是凝胶电泳吧？

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  • cpudaxiao

    第3楼2012/03/12

    核酸的分子量太小，体积也太小，与蛋白结合后不足以改变蛋白的表面核电性质，所以结合蛋白没有单独出峰，调整一下缓冲液吧。

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  • ZZmOsquitO

    第4楼2012/03/13



    不好意思啊忘了说 我用的是bare fused， 不是凝胶的 所以也看电荷的啊 核酸很负的吧应该还是有变化的吧？

    cpudaxiao(cpudaxiao) 发表:核酸的分子量太小，体积也太小，与蛋白结合后不足以改变蛋白的表面核电性质，所以结合蛋白没有单独出峰，调整一下缓冲液吧。

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  • ZZmOsquitO

    第5楼2012/03/13

    不是 我用的是bare fused silica capillary， 忘了说了不好意思

    nini2006(nini2006) 发表:你用的是凝胶电泳吧？

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  • nini2006

    第6楼2012/03/13

    用CZE分离蛋白质的效果不太好的，选择其他模式吧。

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  • ZZmOsquitO

    第7楼2012/03/13

    那如果改成CGE， 然后改更大的DNA呢？

    nini2006(nini2006) 发表:用CZE分离蛋白质的效果不太好的，选择其他模式吧。

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  • nini2006

    第8楼2012/03/15

    不明白你的意思，什么叫改更大的DNA？

    ZZmOsquitO(giraffesnake) 发表:那如果改成CGE， 然后改更大的DNA呢？

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  • nini2006

    第9楼2012/03/16

    一般分离蛋白质这种两性样品的话可以优先考虑等电聚焦电泳（CIEF），对于DNA的分离，一般可以选择任何模式，但是尺寸分离就得使用凝胶电泳和非胶毛细管电泳。

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