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】【极限体验】Ultimate XB-phenyl 柱，清洁验证（3月份）

东风恶

2012/03/15

1 目的

本方案为孟鲁司特钠片生产设备清洗验证所用分析方法的验证步骤。
附件学习：
2 简介

HPLC方法用于孟鲁司特钠片清洗验证活性物质的检测。作为公司自己发展的方法，因此要进行验证以确保该分析方法适用于孟鲁司特钠片的清洗验证。本方案要求验证应包括线性、定量限、检测限、专属性（包括稀释干扰、辅料干扰、棉签干扰、擦拭表面干扰）、准确度（包括棉签回收率和设备表面擦拭方法回收率）和范围。没有特别研究精密度，但是方法精密度可由准确度研究的结果证明。

方法验证应根据本验证方案和附件A：清洁验证分析方法进行。

3 测试用材料及色谱条件
a.标准品、样品、辅料
b.色谱柱：LN：1401.02; SN:141101525；XB-phenyl 柱
c.色谱条件：

4 范围
生产设备活性物质残留的可接受标准为1.3µg/cm²。每一取样点的擦拭面积为25 cm²（5 cm x 5 cm），使用预处理过的棉签进行取样。棉签会用10.0ml稀释液进行浸出，因此样品的可接受限度标准为3.25µg/ml，即清洁分析限度（CLLC）。
因为还未确定包装设备，所以CLLC可在3.25µg/ml上下波动。因此，本方案对CLLC的50%至150%进行方法验证。CLLC的50%至150%这一范围可根据线性和准确度研究结果建立。线性和准确度符合可接受标准的浓度范围即可作为验证后的方法的范围。
5 线性

线性研究在CLLC(3.25µg/ml)的50%至150%这一范围进行。

线性储备液的配制

精密称定32.5mg孟鲁司特钠对照品置100ml的容量瓶中，加入稀释液溶解，并稀释到刻度，精密量取20.0ml到100ml容量瓶中，用稀释液定容至刻度，充分摇匀，贴上“线性储备液”标签。该储备液孟鲁司特钠的浓度为65µg /ml

绘制峰面积与浓度的平面图

进行线性回归分析：确定斜率、Y-截距和相关系数（R²）

根据截距和L3（100%CLLC）溶液平均峰面积比值估计“Y- 轴截距偏差”

计算平均响应因子和每个浓度的平均响应因子相对于L3（100%）的平均相对响应因子

绘制相对响应因子与浓度的平面图

数据有效性标准

三针进样的 RSD ≤5%

可接受标准

相关系数（R²）≥0.99

每一浓度的平均相对响应值在90.0%和110.0%之间。

轴截距偏差≤0.05
6 检测限（DL）和定量限（QL）

DL/QL溶液配制
线性研究产生的色谱图，然后选择合适浓度的溶液进行稀释以配制DL和QL溶液。信噪比为3：1时为DL，10：1时为QL。

图谱顺序：基线、定量限、检测限（3针）。
分析程序：用L3溶液建立系统适用性。进稀释液冲洗，然后DL/QL溶液分别进1针。
7 专属性

方法专属性应验证的是研究稀释液、空白钢板擦拭棉签浸出液和空白棉签浸出液，孟鲁司特钠片辅料的干扰也要研究。

溶液的配制

按附件A中的方法配制流动相和稀释液。稀释液用作将孟鲁司特钠从棉签中浸出的溶液。

空白棉签浸出液的配制

按附件A中的方法预处理棉签。将2个预处理过的棉签置于30ml的玻璃瓶中，用移液管加入10.0ml稀释液，按附件A的方法进行处理。

空白擦拭棉签浸出液的配制

用纯化水清洗不锈钢钢板（316L），钢板自然干燥后。用2只棉签按下面的方法擦拭该钢板。

擦拭面积为25cm²，先以水平方向在擦拭面积处擦拭至少10个来回，翻转棉签，以垂直方向在擦拭面积处擦拭至少10个来回。

将棉签置于一干净的30ml的玻璃瓶中，用干净的剪刀或针头钳将棉签的把柄去除。

使用另一只棉签重复7.3.1和7.3.2步骤，然后置于上一只棉签所在的玻璃瓶中。

按附件A中的方法进行处理。

CLLC浓度的辅料溶液的配制

精密称定61.75mg孟鲁司特钠空白辅料置于100ml容量瓶中。加入约70ml稀释液超声10分钟，冷却至室温，用稀释液定容至刻度（需要时可对该溶液离心）。

分析程序：

用L3溶液建立系统适用性。进一针稀释液进行清洗。然后每个干扰溶液分别进样2针。

数据有效性标准

符合系统适用性要求。

可接受标准

干扰溶液所得的色谱图应表明在检测波长处干扰溶液对主峰的保留时间没有严重干扰

8 回收率（准确度）

清洗验证的样品是通过用纯化水预处理过的的棉签擦拭设备表面得到的。这种取样方法的准确度将通过用棉签擦拭含有已知量孟鲁司特钠的不锈钢钢板而测定的。方法准确度还要通过测定含有已知量的孟鲁司特钠的棉签浸出液进行研究。

棉签回收率

50%CLLC浓度下的棉签回收率

按下述方法制备三份50%CLLC浓度下的棉签回收率溶液：将2只预先处理过的棉签用干净的剪刀去除把柄后置于30ml的玻璃瓶中，用移液管加入10.0ml L1线性溶液。按附件中的方法处理。

100%CLLC浓度下的棉签回收率

按下述方法制备三份100%CLLC浓度下的棉签回收率溶液：将2只预先处理过的棉签用干净的剪刀去除把柄后置于30ml的玻璃瓶中，用移液管加入10.0ml L3线性溶液。按附件中的方法处理。

150%CLLC浓度下的棉签回收率

按下述方法制备三份150%CLLC浓度下的棉签回收率溶液：将2只预先处理过的棉签用干净的剪刀去除把柄后置于30ml的玻璃瓶中，用移液管加入10.0ml L5线性溶液。按附件中的方法处理。

用L3线性溶液做工作标准品溶液。

分析程序：

使用L3线性溶液建立系统适用性。每份回收率溶液进样2次。最后用L3进样做为程序控制标准。

数据有效性标准

符合系统适用性要求

样品溶液的2针进样之间的差异不得大于10.0%

可接受标准

每一浓度的平均回收率在80%和115%之间

三个浓度的平均回收率在85%和110%之间

设备表面擦拭方法回收率

回收率储备液的配制

精密称定32.5mg孟鲁司特钠对照品置100ml容量瓶中，加稀释液定容至刻度，摇匀并贴上 “回收率储备液”的标签，该储备液的浓度为325 µg/ml。

工作对照品的配制（3.25 µg/ml）

取100.0µl回收率储备液用稀释液稀释至10ml。

50%CLLC浓度的设备表面擦拭

需要三份样品。在三块不锈钢钢板上5 cm x 5 cm面积内加入50.0µl的回收率储备液，使钢板自然晾干备用。

100%CLLC浓度的设备表面擦拭

需要三份样品。在三块不锈钢钢板上5 cm x 5 cm面积内加入100.0µl的回收率储备液，使钢板自然晾干备用。

150%CLLC浓度的设备表面擦拭

需要三份样品。在三块不锈钢钢板上5 cm x 5 cm面积内加入150.0µl的回收率储备液，使钢板自然晾干备用。

表面擦拭回收率溶液的配制

对于每块上述制备的钢板，使用2只预处理过的棉签按照步骤擦拭钢板表面，然后萃取棉签。

分析程序：

用工作对照品建立系统适用性，然后每个表面擦拭回收率溶液进2针，程序控制标准品穿插在样品中进样。

数据有效性标准

符合系统适用性要求

样品溶液的2个进样之间的差异不得大于10.0%

可接受标准

每个浓度下的平均回收率应在70%和125%之间。

三个浓度的平均回收率应在75%和120%之间。

回收率测定后，可确定附件中分析方法的计算校正因子。但如果三个浓度的平均回收率大于或等于100%，在计算时不使用校正因子。

9 标准溶液和样品溶液的稳定性

稳定性研究用的分析溶液

使用L3线性溶液作为标准品溶液稳定性研究用的样品溶液

使用回收率研究中的100%表面擦拭回收率溶液作为样品溶液稳定性研究用的样品溶液。

将溶液在正常条件下保存4天，在第1、2、3、4天取样分析，分析所用的工作标准品溶液要新鲜配制。

分析程序

用新配的工作标准品溶液建立系统适用性。每份留样溶液进样2针。程序控制标准品穿插在样品中进样。

数据有效性标准

符合系统适用性要求

样品溶液的2个进样之间的差异不得大于10.0%

可接受标准

每个时间的样品测定值应不得超过最初值的10%

附件：

工艺验证及清洁验证-钱应璞.pdf
附件.rar

精
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相关话题

samanthalas

第1楼2012/03/16

没有谱图呢？
还是没有显示出来呢？

0

samanthalas

第2楼2012/03/16

楼主，何为清洁验证啊？

0

雪妖

第3楼2012/03/16

第一次看见这方面的研究
请问一下活性物质残留是什么呢？

0

阿迈

第4楼2012/03/16

清洁验证：

清洁验证Cleaning Validation：

可证明用于直接与产品接触的设备表面的清洁的程序具有再现性与有效性的书面证据。

清洁验证的基本要求：

评估工艺过程确定应去除残留的类型

选择合适的清洁剂

检查生产设备组成确定清洁方法，取样方法和取样点

检测方法必须适合适用并经验证

必须建立书面接受标准

建立书面证据表明设备已被清洁并符合接受标准

验证或检查中的不符合必须进行调查并通过CAPA程序提出报告

具体要楼主解释哦。
samanthalas(samanthalas) 发表:楼主，何为清洁验证啊？

0

samanthalas

第5楼2012/03/16

那么楼主这个实验要检测清洁度的设备，就是那些钢板吗？
罂粟(mikezhu2010) 发表:清洁验证：

清洁验证Cleaning Validation：

可证明用于直接与产品接触的设备表面的清洁的程序具有再现性与有效性的书面证据。

清洁验证的基本要求：

评估工艺过程确定应去除残留的类型

选择合适的清洁剂

检查生产设备组成确定清洁方法，取样方法和取样点

检测方法必须适合适用并经验证

必须建立书面接受标准

建立书面证据表明设备已被清洁并符合接受标准

验证或检查中的不符合必须进行调查并通过CAPA程序提出报告

具体要楼主解释哦。

0

dahua1981

第6楼2012/03/16

应助达人

为什么没有图呢

0

阿迈

第7楼2012/03/16

清洁验证就是对设备或工具清洁工艺有效性的验证，其目的是所采用的清洁方法确定能避免产品的交叉污染和清洁剂残留的污染。
samanthalas(samanthalas) 发表:那么楼主这个实验要检测清洁度的设备，就是那些钢板吗？

0

冷冷的冰雨

第8楼2012/03/16

楼主的内容很详细，但是看不到图谱

0

东风恶

第9楼2012/03/19

很多，很累，就搞了几张典型图（见附件），不好意思。

0

arvid2007

第10楼2012/03/19

楼主可以选择在有空且网络较通畅的情况上上传图片，这样就不会这么累了
东风恶(luoleqc) 发表:很多，很累，就搞了几张典型图（见附件），不好意思。

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