整理【HPLC】的那些不常被人所知的事

省部重点实验室

2012/03/17

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关于HPLC常识性的东西大家都知道
现在开个帖子整理下那些不常常让人熟稔的小注意事项
小知识点

例如————警告：无论何时，必须保证色谱柱柱床不干涸，尤其是进样检测和柱冲洗过程中不能让流动相长时间（30min以上）走空，否则易使色谱柱干涸且带入大量几乎无法排出的气泡，甚至导致柱床局部塌陷或中部开裂。使用与保存时，严禁用力甩，绝对杜绝不小心猛烈撞击或高处掉落，否则，易导致柱床机械性损坏，则再无再生可能

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第一个————
乙腈的毒性是甲醇的5倍，是乙醇的25倍。价格是甲醇的6~7倍。

反相色谱中，如果要在相同的时间内分离同一组样品，甲醇/水作为冲洗剂时其冲洗强度配比与乙腈/水或四氢呋喃/水的冲洗强度配比有如下关系：

C_乙腈＝0.32C 2甲醇＋0.57C_甲醇

C_四氢呋喃＝0.66C_甲醇

C为不同有机溶剂与水混合的体积百分含量。100%甲醇的冲洗强度相当于89%的乙腈/水或66%的四氢呋喃/水的冲洗强度。

分
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第1楼2012/03/17

第二个——————HPLC用水

HPLC应用中要求超纯水，如检测器基线的校正和反相柱的洗脱。

进行HPLC、GC、电泳和荧光分析，或在涉及组织培养时，没有有机物污染是非常重要的。测高锰酸钾颜色保留时间的定性方法反应慢，对很低水平的有机物（对HPLC可能还是太高了）不够灵敏，特别是不能定量。总有机碳(TOC)分析仪（把
有机物氧化成CO₂，测游离的CO₂）常用于I类（NCCLS）水中低浓度有机物的测定。

I类水标准：

	NCCLS	ASTM
电阻率，MΩ·cm，25℃，最小	10.0	18.0
硅酸盐，mg/L，最大	0.05	0.003
微粒，µm滤器	0.22	0.2
微生物，CFU/ml	10	分三档

美国药典24版（2000年）要求TOC＜0.5 mg/L（用标准蔗糖溶液1.19 mg/L），电导率在室温pH 6时≤2.4 µS/cm（即≥0.42 MΩ·cm）。HPLC级水增加吸收特性：在1cm池中，用超纯水作空白，在190nm、200nm和250~400nm的吸收度分别不得过0.01、0.01和0.05。增加不挥发物，≤3ppm（中国药典纯水≤10ppm）。

《实验室用水规格》GB6682-92

	PH 25℃	电导率25℃μS/cm	比电阻25℃ MΩ·cm	可氧化物以O计mg/L	吸光度254nm,1cm	蒸发残渣mg/L (105±25℃)	可溶性硅以SiO₂计mg/L
一级	——	≤0.1	≥10	——	≤0.001	——	＜0.01
二级	——	≤1.0	≥1	＜0.08	≤0.01	≤1.0	＜0.02
三级	5.0-7.5	≤5.0	≥0.2	＜0.40	——	≤2.0	——