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关于用HPLC检测DEXTRAN的问题

液相色谱(LC)

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  • 我目前在用HPLC检测两个分子量(11万和29万)的dextran,出来的谱图非常奇怪,两者单一组分的图均有多个峰出现,但又不像溶剂峰,而且出峰时间非常接近,于是我将两者混溶后再次进样,分开,未分开我也不能确定,希望高手帮我解答一下,急……图07是11万的,图08是29万分子量的,0708混合样是两者混合的。07的浓度是2mg/ml,08 1mg/mg,0708 1mg/ml.用的是WATERS HPLC仪器,G4000凝胶柱,进样量10UL,示差检测,柱温35度,流动相为娃哈哈瓶装水,流速1ml/min.

    dextran分子量为11万的图谱



    29万的图谱

    两者混合的图片

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  • 有水有渝

    第1楼2012/04/19

    应助达人

    葡聚糖,右旋糖酐
    是以两液1:1混合吗,怎么11.8分钟的异常增大这么多,这个是药典上的方法吗,如果不是可以试试药典上的方法。

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  • buqingyun

    第2楼2012/04/20

    对,是以两者1:1混合,11.8分的和图上其它的都可能是是仪器原因,均在此范围存在的峰。所有用此仪器做出的图均有。我买的国产的标准品,为什么会有两个不同的峰出现?混合后这个图如何解释我也不太懂,请帮我分析一下!还是我的方法有问题,直接没有分开。

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  • 有水有渝

    第3楼2012/04/20

    应助达人

    国产的标准品有没有说明纯度,有杂质峰如果不是空白溶剂影响,那可能就是对照品不纯。你的检测方法来自哪里,是首次检测吗?

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  • buqingyun

    第4楼2012/04/20

    因为我们实验室是专门做多糖相关的,以前都拿SIGMA的做标准曲线,就用G4000的柱子建 立了一个方法,大概都相同的。我的实验因为与他们有点区别,用量大就买了国产的标准品,没有说明纯度,问了下老师他说可以用,我就拿过来做实验的。没有想到测出来会是这种结果。空白溶剂峰不是应该顶端较平的那种吗,其实说真的我对这个峰形不是很会看,望赐教 。

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  • dudubug

    第5楼2012/04/22

    我觉得,前面的不是溶剂峰,可能由于标准品不纯,其中的杂质峰,平均分子量为28万的标准品是不是有问题!

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  • buqingyun

    第6楼2012/05/05

    我也觉得有问题,正在验证!

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