省部重点实验室
第1楼2012/05/06
(三) 试剂和器材
1. 试剂
(1) 缓冲液 a. 0.05M, PH9.6 Na2CO3-NaHCO3缓冲液(包被液)
b. 0.01M, PH7.4 PBS-Tween20缓冲液(抗体稀释液)
c. 0.02M, PH7.4 Tris-HCl-Tween20缓冲液(洗涤液)
(2) 抗体 a. 抗HBsAg抗体
b. HRP标记的抗HBsAg抗体
(3) 抗原 a. 正常人血清(HBsAg阴性对照)
b. HBsAg阳性标准品
c. 待检血清
(4) 小牛血清
(5) 底物溶液
1.0ml EDTA (1.0×10-2M)
2.0ml Eosin(1.0×10-3M)
1.0ml H2O2(7.5×10-3M) 用三蒸水稀释到25ml
0.4ml HCl (1.0×10-2M)
0.2ml Tween20 (1%)
luminol 5.0×10-4M
2. 器材
(1) LKB-1250 lumimeter
(2) 隔水式电热恒温培养箱
(3) 各种规格加样器,小玻璃试管,聚苯乙烯珠
(4) 洗瓶、抽滤装置等
省部重点实验室
第2楼2012/05/06
(四) 注意事项
1. 洗涤要彻底,以免因血清中其他来源的过氧化物酶类物质所产生的非特异性反
应,而影响测定结果。
2. 实验中,应分别设置阳性、阴性、空白对照来控制实验条件,且每份样品均应做三个复管,以保证实验结果的准确性。
3. 为了克服酶标抗体因非特异性吸附而造成的较高本底,可用适量小牛血清加以抑制。
4. 当加入luminol后,迅速产生化学发光并使发光在一秒钟内达到峰值,犎;后很快衰减到基线水平。因此,只有当小试管置于仪器的测量位置时,方可加入luminol。
5. 底物的加入,是为了增强化学发光强度。但只有当底物分子与酶催化活性中心充分接触时,反应速度才能加快。当反应进行15min达到平衡时,牷/学发光强度则不再随时间的延长而变化,且在1h内保持稳定,因此,控制底物与酶反应15min后加luminol进行化学发光测定。