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仪器介绍 III:冷光仪(原子摩尔光度计、生化发光检测仪、化学发光仪) LuminMax-C

ericwong

2012/06/06

LuminMax-C（冷光仪,又称:化学发光光度计、化合光以及生物发光检测仪、化学发光仪、BL/CL分析仪）技术简介
引言
生物发光和化学发光是自然界中一种常见现象。发光主要物质是由酵素（如：虫荧光素酶）、受质（如：荧光素）及其辅助ATP等所组成。如未涉及细胞，ATP是不需要的。所以二种重要的化学物质是酵素和受质：若将这二者放在一起就会产生化学冷光。光强度与酵素浓度成线形关系，所以检测光度就可定量浓度。
化学发光指化学反应过程中发射出来的光，又称冷光；生物发光是化学发光的一种，专指由酶催化的化学反应过程中发射出的光。化学和生物发光经常被用于测定样品中未知成分的量，并且在过去的十年里在基因表达和基因调控的研究中发挥着非常重要的作用。
通过发射光的比率可以推出未知成分的浓度，因此测定化学反应过程中的发射光是非常有用的。反应过程中产生的光与发射光的量产率是直接相关的，相应的，与发光物质的浓度成比例。因此，反应过程中的光可以相对反映出目标样品中发光物质的量。
近年来，生物发光和化学发光的研究及使用与日俱增。从测试细胞活性的ATP-荧光素酶检验，到当今的DNA、基因及蛋白质分析的应用日益扩大。与荧光发光不同，它不需要外部光源。冷光是从化学反应所产生的。利用光子计数检测器，通过对反应中所产生的光子计数，冷光检验已成为最灵敏的光学检测方法之一。美国Maxwell Sensors公司的LuminMax-C研究级化学发光仪（冷光仪）为广大用户提供了一款具有超高灵敏度和重复精度、易使用、结构紧凑及经济实用的仪器。该仪器可测量96孔微孔板（黑或白）中的发光强度。微孔板底部很清洁，因此，从孔的底部产生的发光即可被检测。
用途
化学发光仪经常被用于：
·ATP（三磷酸腺甙）检验、荧光素酶检验
·免疫及proteomics
·核酸，DNA及基因组
·病毒研究（比如：SARS、禽流感病毒研究）
·临床诊断研究
·染色体分析
·毒性试验
·细胞活力试验
·餐馆卫生检测
·环境检测
·工业、农林业、畜牧业、养殖业等其它用途
最广泛用途是对利用报告基因检测目标基因的表达以及检测细胞内 ATP 水平。
1. 报告基因实验：
分子生物学家和细胞生物学家利用报告基因研究基因的表达和调控。将报告基因引入细胞 DNA 使之与某一特定分子事件相关，可以为这一分子事件带来可测性。通常检测的分子事件是基因功能，具有可测性的是发光。目前，市场上有许多发光报告基因出售。包括：萤火虫荧光素酶
（ firefly luciferase ），β－半乳糖苷酶（ B -galactosidase ），β－葡萄糖苷酸酶（B -glucuronidase ， GUS ），碱性磷酸酶
（ alkaline phosphatase ），和人生长激素（ human growth hormone ， hGH ）。高灵敏度，低成本，快速以及使用简单使得发光检测仪成为理
想的基因表达研究工具。
2. ATP 水平测定：
所有活细胞都含有 ATP 。 ATP 可以从细胞中提取出来，用萤火虫荧光素酶检测。在这个发光反应中，ATP 是限制性反应物。因此，到达发光检测仪光电倍增管的光与样品中 ATP 的含量成比例，相应的与提取 ATP 所用的细胞数成比例。ATP发光检测方法已经使用了几十年。ATP的测量被应用于：
• 水，食物，药品，化妆品中的微生物污染检测：ATP的发光检测方法可以检测样品中的所有微生物，因而被用于检测水中的大肠杆菌含量，包括饮用水和用于oil field injection ， cooling system 以及纸加工过程的工业用水。ATP的发光检测方法还可以用于药品，化妆品，牛奶以及其它食品的微生物控制。
• 生物数量评估：微生物学家通过检测 ATP 的含量测定土壤和沉积物中的全部活生物含量。相关研究还包括污染物对淡水和海水微生物的影响。
• 临床研究：临床研究应用包括：评价抗生素对微生物生长的影响，了解不同药物对哺乳动物细胞的影响等。
应用场所：
· 高等院校生命科学及生物化学实验室；生物化学技术研究院所实验室
· 医院研究实验室；生物制药实验室
· 政府药检、商检、疾控中心实验室
· 环境试验室；法医试验室
· 食品等工业质量控制和检测试验室
主要特点：
优点
• 化学发光定量检测法相对于其它分析技术有许多优点：非常灵敏；动力学范围广；仪器设备便宜；这一新的发光实验方法的出现使得这一技术的应用非常广泛。LuminMax-C使用了超级光电倍增管作为检测器，它具有极高的灵敏度。检测灵敏度可达10-18 摩尔（HRP）以上。它具有检测从反应中产生光子数的能力，这意味着它可以检测样品中被分析物极小的份量（浓度）。
• 优秀的灵敏度和低背景使发光检测仪从其它分析方法中脱颖而出。发光检测仪比吸收光谱仪灵敏 100,000 倍，比荧光仪至少灵敏 1,000 倍。
• 在发光反应中，有两种成分的光能够到达检测仪。第一种与化学发光反应中的有限的反应物的浓度成比例。第二种也就是背景光，是基本不变的，与反应物中的塑料、杂质发出的磷光等有关。相对于分光光度计和荧光仪等其它检测技术，化学发光检测仪的背景光非常低。
• 广泛的动力学范围和低仪器成本也是化学发光检测仪的优势。不需稀释样品或对样品细胞进行修饰，测量范围可以达到7个数量级以上的浓度。
• 使用简单方便：具有用户友好界面的软件在随机奉送的光盘里，它非常容易安装。LuminMax-C不但体积小巧，而且通过简单的插入式连接（USB或者串口）与计算机相连，便于携带。当按下“GO”键，系统自动并快速地扫描所有选中的微孔，并且显示结果。计算结果以电子表格的形式显示。数据以光子数或相对光单元（RUL）作为报告被显示。
技术参数：
盘形式: 微光度测定盘(96孔板)
光辐射探测: 生物或化合光
灵敏度: 光电计数器，１attomole HRP（10-18 摩尔HRP）
波长:300-680nm
操作: 自动扫描所有的孔
可调节integration时间 (0.01-10.0 秒)
可调节扫描次数
接线: 显示所有的microwell数据
容易校准
数据输出: Excel格式
连接PC的以太网接口
软件: 用户易使用的软件
尺寸: 30.5 X 28 X 14 (+2.5) CM

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ericwong

第1楼2012/06/20

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