高效液相色谱法的建立步骤介绍

步骤二：
　　　样品的预处理：

１．可直接进样的溶液

２．需稀释、缓冲pH或添加另一液体

３．能在流动相中溶解的固体

４．含有干扰物质或“损柱剂”而必须在进样前将其去除的溶液

５．含有不溶性赋形剂的混合物

主要HPLC方法的特性

反相HPLC:
流动相：水/有机溶剂
色谱柱：C-18(ODS),C-8,苯基，三甲基硅烷(TMS),氰基

应用范围：首选为能溶于水/有机混合液的中性或非离子化合物

正相HPLC：

流动相：有机溶剂混合液
色谱相：氰基，二醇基，氨基，硅胶
应用范围：当反相或离子对HPLC无效时的第二个较好的选择；首选为不溶于水/有机溶剂混合液的亲脂样品、异构体混合物和制备HPLC（硅胶最好）

离子对HPLC:
液动相：水/有机溶剂
　　　　一种缓冲物控制pH，和离子对试剂
色谱柱：C-18,C-8,氰基
应用范围：为离子或可电离化合物，尤其碱性或阳离子化合物的良好选择。

建立HPLC方法的目的：
１．分离度：精密度和抗干扰的定量分析需Rs>1.5

２．分离时间：<5-10min时日常工作较理想

３．定量：含量测定；<=２％（１SD）；要求不高的或痕量分析：５％

４．压力：最好<150bar;<200bar通常是基本的（假设为新柱）

５．峰高：最好为信噪比在的窄峰

６．溶剂消耗：每个样尽量少消耗流动相

保证良好柱寿命的步骤：

１．用填充良好的柱

２．尽量减小压力波动；避免机械及热冲击

３．用保护柱和在线滤片

４．经常用强溶剂冲洗柱子

５．预处理“脏样品”，以尽量减少无用的强滞留成份和微粒

６．用稳定的固定相

７．用低于60度的柱温

８．硅胶基质柱要保持流动相pH在3-7之间；如超出此限制操作是，须安装预柱

９．在水溶液流动相或缓冲液中加100ppm的叠氮化钠

１０．过夜和贮存时，冲洗掉盐和缓冲液，以纯乙腈保存柱，避免高浓度的水和醇类。

色谱常用符号与术语：

ACN:乙腈
RRT:相对保留时间
F:响应因子
MTBE:甲基叔丁醚
pKa：溶质酸性常数的负对数；当pH=pKa时，溶质中有一半是电离的
ODS:十八烷基硅烷Octadecylsilyl
BDS:碱纯化硅胶 Base deactive silica
TEA:三乙胺
TBA:四丁基铵离子
THF:四氢呋喃
TLC:薄层色谱法Thin layer chromatography
TMS:三甲基硅烷

以上为《实用高效液相色谱法的建立》摘抄部分。

谢谢楼主分享，学习一下。

化合物的pKa值
很重要，可是经常查不到啊

分离时间：<5-10min时日常工作较理想 ，这个，对于HPLC来说好像比较困难，尤其是多化合物同时分析

分享一下 大家一起学习

甲基叔丁醚 是什么？应该是试剂吧？主要是什么作用呢？

论坛 资料库里面都有哦

PDF格式的一张表

好几种版面的一张表

多化合物同时分析 这个时间要长一些