甲醇酵母表达常用溶液及缓冲液的配制

1.2.4 TE缓冲液：

10mmol / Tris-CI（pH 8．0）， lmmol / L EDTA（pH 8.0）

1.2.5 STE缓冲液：

0.1mol / L, 10mmol / L Tris-HCl (pH 8.0), 1mmol / L EDTA (pH 8.0)

1.2.6 SCE缓冲液：

1mol / L Sorbitol (山梨醇), 10mmol / L 柠檬酸钠 ， 10mmol / L EDTA

1.2.7 1M potassium phosphate buffer （pH 6.0）：

132 ml 1M K2HPO4

868 ml 1M KH2PO4

1.2.8 50X TAE 琼脂糖凝胶电泳缓冲液，pH 8.0（1L）：

242 g Tris

57.1 ml Acetic Acid

37.2 g EDTA

2．毕赤酵母表达的培养基配制

2.1 LB（Luria－Bertani）培养基：

Trypton l％

Yeast Extract 0.5％

NaCl l％

PH 7.0

制作平板时加入 2％琼脂粉。121℃高压灭菌 20min。可于室温保存。用于培养pPICZαA原核宿主菌TOP10F’时可加入Zeocin 25ug / ml。

2.2 LLB（Low Salt LB）培养基：

Trypton l％

Yeast Extract 0.5％

NaCl 0.5％

PH 7.0

制作平板时加入 2％琼脂粉。121℃高压灭菌 20min。可于室温保存数月。用于培养pPICZαA原核宿主菌TOP10F’时，加入Zeocin 25ug / ml，可以4℃条件下保存1～2周。

2.3 YPD （又称YEPD）

Yeast Extract Peptone Dextrose Medium，（Yeast Extract Peptone Dextrose Medium，酵母浸出粉/胰蛋白胨/右旋葡萄糖培养基）

Trypton 2%

dextrose (glucose) 2%

+agar 2%

+Zeocin 100 μg/ml

液体YPD培养基可常温保存；琼脂YPD平板在4℃可保存几个月。加入Zeocin 100ug / ml，成为YPDZ培养基，可以4℃条件下保存1～2周。

2.4 YPDS + Zeocin 培养基（Yeast Extract Peptone Dextrose Medium）：

yeast extract 1%

peptone 2%

dextrose (glucose) 2%

sorbitol 1 M

+agar 2%

+ Zeocin 100 μg/ml

不管是液体YPDS培养基，还是YPDS + Zeocin 培养基，都必须存放4℃条件下，有效期1～2周。

2.5 MGY

Minimal Glycerol Medium （最小甘油培养基）

（34%YNB；1%甘油；4*10-5%生物素）。将800ml灭菌水、100ml的10*YNB母液、2ml的500*B母液和100ml的10*GY母液混匀即可，4℃保存，保存期为2个月。

2.6 MGYH

Minimal Glycerol Medium + Histidine （最小甘油培养基 + 0.004%组氨酸）

在1000ml的MGY培养基中加入10ml的100*H母液混匀，4℃保存，保存期为2个月。