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有关DNA检测

生物制药

  • 样品是脱氧核糖核酸物质,想测核糖核酸的含量,请问怎样测?药典没有找到方法
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  • JOE HUI

    第1楼2024/08/29

    应助达人

    如果想测定样品中核糖核酸的含量,可以采用定糖法。

    定糖法的原理是:核糖中的戊糖可在浓盐酸或者浓硫酸作用下脱水生成醛类化合物,该化合物可与某些成色剂缩合成有色化合物,可用比色法或者分光光度法测定其溶液中的吸收值,在一定的浓度范围内,溶液的吸收值与核酸的含量成正比。

    具体操作如下:

    1.?核糖的测定:生成的绿色化合物在λ=670nm 处有最大的吸收值。

    2.?脱氧核糖的测定:DNA 中的脱氧核糖可在浓硫酸作用下脱水生成ω-羟基-γ-酮戊酸,该化合物可与二苯胺生成蓝色化合物,在λ=595nm 处有最大吸收值。

    该方法的优缺点是:较灵敏,但特异性较差,凡戊糖都有此反应。

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  • 123

    第2楼2024/08/29

    应助达人

    测量脱氧核糖核酸(DNA)含量的常用方法包括紫外吸收光谱法、荧光染料定量法、定磷法等。紫外吸收光谱法是基于核酸分子中碱基的紫外吸收特性,特别是在260nm处的吸收峰来定量核酸的浓度。这种方法简单、快速,是实验室中常用的定量方法。荧光染料定量法则使用特定的荧光染料,如SYBR Green I,与核酸结合后通过测定荧光强度来定量核酸含量。这种方法灵敏度高,特异性好,适用于低浓度样品的定量。定磷法是通过测定核酸中磷的含量来计算核酸浓度,这种方法适用于需要高准确度的场合。

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