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紫外结果不合适,求问题所在

紫外可见分光光度计(UV)

  • 前几天测了几个紫外,样品是还原型谷胱甘肽溶解在PB缓冲液中,浓度40μg/ml。但是结果很不合适,感觉全是末端吸收,而且在200~214nm透过率直接为0%,减小浓度后作用也不大。
    是否与比色皿质量有关,
    空白比色皿吸收
    谷胱甘肽 透过率 40μg/ml 和1μg/ml
    谷胱甘肽 吸收 40μg/ml 和1μg/ml
    求高人解答,是什么问题,做过几个其他样品,结果也都相似,峰型都是逐渐上升状。
    标准的谷胱甘肽检测貌似是在0.1mM NaOH中进行的,在214及230有两个峰,我也试过,结果与在PB缓冲液中没有区别。
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  • ldgfive

    第1楼2012/07/04

    应助工程师

    看你的谱图,应该是属于样品自身吸收

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  • 绿洲

    第2楼2012/07/04

    是不是仪器出问题了?换个其他样品试试?

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  • aghos

    第3楼2012/07/04

    又换了几个样品试了下,发现同样的问题,扫了下基线发现扫不平,具体怎么解决还不知道。
    上一张图,
    甲醇为空白autozero,然后测定空白甲醇的吸收
    自上而下 依次为150μg/ml 阿司匹林 75μg/ml 15μg/ml 溶剂均为甲醇 及空白甲醇吸收


    以前都是扫500~600的,扫了几次都以为是样品处理的不好。样品浓度很小的时候峰型与上图基线基本重合,增大浓度后一些紫外吸收强的基团在300nm可以看得见吸收峰,300nm以下就会出现毛刺,透过率0%。

    是不是仪器问题?导致200~300nm的数据不可用?
    谢谢各位的解答

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  • aghos

    第4楼2012/07/05

    谢谢诸位的解答,问题解决了。
    原因是我自己对仪器不熟悉,导致在检测过程中空白扣除的不合适。
    今天重新测了,把空白口合适了之后,测得谱图很不错,样品浓度低点就能用了。

    看来以后结果不合适还是要先从自身找问题。。。仪器一般还是比较稳定的。

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  • 夕阳

    第5楼2012/07/05

    应助达人

    怕是氘灯坏了吧?

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