1 仪器及材料仪器:Agilent GC-MS 7890-5975c;涡旋混合器;旋转蒸发仪;玻璃器皿:30mL样品瓶;200mL鸡心瓶;容量瓶;进样样品瓶;材料及试剂:氨基甲酸乙酯专用净化柱;氨基甲酸乙酯标准品;PTFE滤膜;二氯甲烷、甲醇均为色谱纯;无水硫酸钠(经600度煅烧);
2 标准溶液配制
准确称取约0.1g(精确至0.0001g)氨基甲酸乙酯标准品于100mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,得到标准储备液。用甲醇逐级稀释储备液,得到20、10、5、1、0.1、0.05(单位为μg/mL)标准溶液,用于绘制标准曲线。同时稀释得到标准工作液4μg/mL、40μg/mL、400μg/mL,用于进行加标回收率实验。
3 GC-MS操作条件
3.1 GC条件毛细柱DA-INOWAX(30m*0.25mm*0.25um);进样口温度230℃;载气:高纯氦气;流速1ml/min;程序升温:60℃(5min)3.5℃/min 150;不分流进样,进样量1μL。3.2 MS条件接口温度:240℃,电离方式:EI,电子能量:70eV,离子源温度:230℃,四级杆温度:150℃;扫描模式:SIM模式,监测离子:62,74,89,其中定量离子为62.
4 样品处理
4.1 黄酒加标样品称取20g黄酒于30mL样品瓶中,加入标准工作液0.1mL,涡旋混合均匀,将样品载入到净化柱上,静置10min以保证黄酒样品和填料充分湿润。用3*40mL二氯甲烷洗脱,每次间隔1-3min,用鸡心瓶收集洗脱液,将洗脱液在40℃下旋转蒸发至约1mL,转移溶液至带刻度试管中,用2*1mL甲醇洗涤鸡心瓶,将洗涤液也转移至试管中进行合并,并用甲醇定容至4mL,加入少量无水硫酸钠,静置5min,用PTFE滤膜进行过滤,收集,取少量入进样样品瓶,待测。4.2 黄酒样品量取20g黄酒,将样品载入到净化柱上,往下操作步骤同4.1(将样品载入到净化柱上,静置……)。4.3 空白样品量取20g去离子水,将样品载入到净化柱上,往下操作步骤同4.1(将样品载入到净化柱上,静置……)。
5 实验结果
色谱图将处理得到的样品在仪器条件(3)下进行检测,得到的色谱图如图1~图3.
图1 标准溶液色谱图(浓度为1μg/mL)
图2 黄酒样品加标色谱图(定容浓度为1μg/mL)
图3 黄酒样品色谱图
标准曲线
将步骤(2)配制的标准溶液,在仪器条件(3)下进行检测,绘制标准曲线,得到线性方程为y=2.19e+005*x+4.40e+003(相关系数为0.999),其中y为峰面积,x为目标物浓度(μg/mL),方法检出限为3ng/mL,定量限为10ng/mL
加标回收率及精密度
称取17份20g酒样,其中5份分别加入浓度为4μg/mL标准工作液0.1mL,5份分别加入浓度为40μg/mL标准工作液0.1mL,另外5份分别加入浓度为400μg/mL标准工作液0.1mL,余下2份酒样作为空白,在条件(4)下进行样品处理,将得到的样品在仪器条件(3)下进行检测,结果如表1所示。
表1 加标回收率及精密度
加标浓度/μg/mL | NO.1 | NO.2 | NO.3 | NO.4 | NO.5 | 平均回收率 | RSD(n=5) |
0.02 | 87.20% | 96.70% | 110.50% | 90.70% | 95.20% | 96.06% | 9.27% |
0.2 | 99.20% | 91.10% | 89.40% | 88.10% | 97.20% | 93.00% | 5.29% |
2 | 88.80% | 89.10% | 90.30% | 95.70% | 86.50% | 90.08% | 3.81% |
计算公式
样品中氨基甲酸乙酯的含量(X)以mg/kg表示,按式(1)计算:X=(C1-C2)*V/m…………………………..(1)
式中:C1为试样中氨基甲酸乙酯的含量,单位为μg/mL;C2为空白试样氨基甲酸乙酯的含量,单位为μg/mL;V为试样最终定容体积,单位为mL;m为称取试样的质量,单位为g。
6 结论
实验结果表明,该净化柱对氨基甲酸乙酯能有较好的回收率,同时,使用该净化柱能较好的去除酒中的氨基酸、蛋白质、糖、有机酸等干扰成分。该方法黄酒用量为20g,洗脱剂用量为120mL,对氨基甲酸乙酯含量较低的酒样能有较高的富集倍数,该方法实验操作快速、简便,可应用于大批量样品的前处理。
附录一
实验中所用耗材订货号见表2
表2 耗材及订货号
耗材 | 货号 |
氨基甲酸乙酯专用净化柱 | EC2000060 |
30mL样品瓶 | 2409-0839 |
进样样品瓶 | 1109-0259 |
PTFE滤膜 | AM041320 |
DA-INOWAX | 2025-3002 |
附录二
针对氨基甲酸乙酯含量较高的样品,可以减少取样量,具体方法如下:
称取2g黄酒于10mL样品瓶中,加入标准工作液50μL,涡旋混合均匀,将样品载入到净化柱上,静置10min以保证黄酒样品和填料充分湿润。然后用12mL二氯甲烷洗脱,用流速调节阀控制流速为2 mL/min左右,用带刻度试管收集洗脱液,将洗脱液在30℃下氮吹至1mL(若体积小于1mL可以用二氯甲烷定容至1mL),加入少量无水硫酸钠,静置5min,用PTFE滤膜进行过滤,收集,取少量入进样样品瓶,待测。
对应于2g样品的净化柱的货号为:EC20006
其他测试方法同20g取样量的方法。完整方法链接请点击 这里。