沉降菌的检测方法：用大豆酪蛋白琼脂培养基(TSA)

4 测试方法

4.1 方法概述

本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。

4.2 所用的仪器和设备

4.2.1 高压消毒锅

使用时应严格按照仪器说明书操作。

4.2.2 恒温培养箱

必须定期对培养箱的温度计进行检定。

4.2.3 培养皿

一般采用Æ90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。

4.2.4 培养基

普通肉汤琼脂培养基或其他药典认可的培养基。其配制方法见附录A（标准的附录）。

4.3 测试步骤

4.3.1 采样方法

将已制备好的培养皿按5.4.1.2的要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5h，再将培养皿盖盖上后倒置。

4.3.2 培养

4.3.2.1 全部采样结束后，将培养倒置于恒温培养箱中培养。

4.3.2.2 在30℃～35℃培养箱中培养，时间不少于48h。

4.3.2.3 每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作对照培养。

4.3.3 菌落计数

4.3.3.1 用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查，不否遗漏。

4.3.3.2 若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2 个或2个以上菌落计数。

4.4 注意事项

4.4.1 测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。

4.4.2 采取一切措施防止人为对样本的污染。

4.4.3 对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。

4.4.4 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉定物的区别，必要时用显微镜鉴别。

4.4.5 采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。

5 测试规则

5.1 测试状态

5.1.1 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。

5.1.2 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）已经过消毒。

5.1.3 测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。

5.2 测试人员

5.2.1 测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。

5.2.2 静态测试时，室内测试人员不得多于二人。

5.3 测试时间

5.3.1 对单向流，如100级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始。

5.3.2 对非单向流，如10 000级、100 000级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。

5.4 沉降菌计数

5.4.1 采样点数目及其布置

5.4.1.1 最少采样点数目

沉降法的最少采样点数可按表1确定。

表1 最少采样点数目

表2 最少培养皿数