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蛋白样品用RP-HPLC在缓冲液中不出峰

wmmsx

2012/08/21

液相色谱（LC）

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刚开始接触蛋白分析，样品等电点在5.0左右，使用C4，300A的反相柱，使用0.1%TFA和乙腈作为流动相，出峰正常，但换用20mM磷酸盐缓冲液(pH=6.5和4.5)和乙腈洗脱就没有峰，调高了乙腈比例仍然没有峰，请有经验的朋友指点，谢谢。

有水有渝 2012/08/23

如果0.1%TFA分不开，那20mM磷酸盐缓冲液就更分不开，前者有一定的离子对作用，有助于分离，可以把有机相的比例降点，梯度洗脱，网上有什么相关文献可以参考。也要弄清楚你样品的成分，不然在乙腈存在条件下，可以蛋白会析出。

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有水有渝

第1楼2012/08/23

应助达人

0.1%TFA用的好好的为什么改成20mM磷酸盐缓冲液呢，但应该也不会不出峰，只是出峰可能提前。

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wmmsx

第2楼2012/08/23

使用0.1%TFA分不开所以换用缓冲液试试。但是无峰
有水有渝(xky0230699) 发表:0.1%TFA用的好好的为什么改成20mM磷酸盐缓冲液呢，但应该也不会不出峰，只是出峰可能提前。

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有水有渝

第3楼2012/08/23

应助达人

如果0.1%TFA分不开，那20mM磷酸盐缓冲液就更分不开，前者有一定的离子对作用，有助于分离，可以把有机相的比例降点，梯度洗脱，网上有什么相关文献可以参考。也要弄清楚你样品的成分，不然在乙腈存在条件下，可以蛋白会析出。

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wmmsx

第4楼2012/08/27

谢谢。我再试试吧
有水有渝(xky0230699) 发表:如果0.1%TFA分不开，那20mM磷酸盐缓冲液就更分不开，前者有一定的离子对作用，有助于分离，可以把有机相的比例降点，梯度洗脱，网上有什么相关文献可以参考。也要弄清楚你样品的成分，不然在乙腈存在条件下，可以蛋白会析出。

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seannoy

第5楼2015/11/05

应该是没保留和溶剂峰一起出来了吧

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zenghaijin

第1楼2015/11/09

ph4.5的流动相不合适，太靠近等电点了，再调低点吧

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