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用ESI源质谱(如ESI-Q-TOF)测大分子完整蛋白分子量

液质联用(LCMS)

  • 最近在考虑用ESI源大分子蛋白的分子量的问题,总结起来有如下:

    1 用ESI源的质谱(比如常用的ESI-Q-TOF)测大分子完整蛋白(比如:BSA,分子量约64KDa)的分子量有哪些难点?对比测多肽来说有哪些不同的地方(参数设置,以某种质谱为例,毕竟不同的公司离子源的设计不一样)。

    2 现在用Q-TOF测完整蛋白分子量的比较多(AB,Waters的机器都有人做过),但用离子阱,或者离子阱串联的其它质量分析器很难(有文献报到,但是不多),为什么?大分子很难被离子阱囚禁?还是说大分子在离子阱内聚焦的时候容易被碰碎?

    大家畅所欲言哈,也欢迎各位兄弟关于这个主题(ESI源测大分子蛋白)提出自己的问题或者见解。
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  • daoyuanli

    第1楼2012/11/22

    顺便调查下子,有没兄弟用其它的质量分析器(前提是ESI源的)去分析大分子蛋白的完整分子量,比如orbitrap什么的。
    如果有的话请兄弟跟帖说一下是什么质量分析器,分析的最大的蛋白的分子量大概是多少,谢谢!
    顺便顶下帖,哈哈。。。

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  • peter2006

    第2楼2012/11/23

    ESI测完整蛋白一般都是测出来的多电荷的,然后用软件去卷积化,得到原来的分子量。

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  • daoyuanli

    第3楼2012/11/24

    对的,相比于MALDI-TOF,这样测出来的更加准确,误差要更小,

    以前用MALDI-TOF测BSA,误差至少在50-100da左右,但是用ESI-Q-TOF或者ESI-orbitrap测,误差可以减小到10Da以内。

    但是相比于用ESI源去测多肽,大分子蛋白还是有一些差别的。

    peter2006(peter2006) 发表:ESI测完整蛋白一般都是测出来的多电荷的,然后用软件去卷积化,得到原来的分子量。

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  • lics05

    第4楼2012/11/25

    关键是样品不含盐,我是充分透析后再上ESI质谱的。跟测多肽比最大缺点是不能用二级质谱定结构。

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  • daoyuanli

    第5楼2012/11/25

    直接用ESI-MS/MS对完整蛋白进行表征确实很难,不过有人已经尝试过,附上一篇相关文献,大家可以研究下。

    另外,大分子物质在电喷雾离子化过程中确实有别于小分子物质,就比如AB之前的Q-TOF上面采用的Collisional cooling技术,就是针对完整蛋白或者蛋白复合物设计的。

    在ESI离子化过程中,容易形成溶剂簇离子,在进入质量分析器之前需要去簇离子,大分子蛋白可能结合的簇离子比较多,在去簇离子时是不是有别于小分子多肽呢?就比如AB q-star 上的Declustering potential voltage,设置小了,可能效果不明显,设置大了,可能在去掉溶剂簇离子的同时使蛋白碎裂,这仅仅只是我的一个疑问哈。

    lics05(v2634939) 发表:关键是样品不含盐,我是充分透析后再上ESI质谱的。跟测多肽比最大缺点是不能用二级质谱定结构。

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  • m3147426

    第6楼2018/01/28

    我们也想测蛋白,你测出来了么?

    daoyuanli(daoyuanli) 发表:顺便调查下子,有没兄弟用其它的质量分析器(前提是ESI源的)去分析大分子蛋白的完整分子量,比如orbitrap什么的。如果有的话请兄弟跟帖说一下是什么质量分析器,分析的最大的蛋白的分子量大概是多少,谢谢!顺便顶下帖,哈哈。。。

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  • Ins_8df4951c

    第7楼2023/03/28

    可以看一下融智生物的蛋白质谱检测范围是10-100000,但他主要是聚焦的是蛋白和多肽大分子检测,重点关注临床诊断蛋白标志物。运用于临床诊断标志物多一些,做科研的少一些

    m3147426(m3147426)发表:我们也想测蛋白,你测出来了么?

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