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华大基因培训改良的Bradford法测定蛋白质含量

省部重点实验室

2012/12/20

生命科学仪器综合讨论

基本原理
蛋白质与染料考马斯亮蓝G—250结合，使得染料最大吸收峰从465nm变为595nm，在一定的线性范围内，反应液595nm处吸光度的变化量与反应蛋白量成正比，测定595nm处吸光度的增加即可进行蛋白定量。

试剂与器材
一、试剂
1．试剂A：考马斯亮蓝G—250原液
称取100mg考马斯亮蓝G—250溶于50mL 95%的乙醇，加入100mL 85%（W/V）磷酸。
2．试剂B：0.01%考马斯亮蓝G—250测定工作液
将考马斯亮蓝G—250原液与双蒸水按15：85比例混匀，过滤。
4℃，棕色瓶保存。
3．0.1N 盐酸和双蒸H2O（新鲜备制，浓盐酸稀释120倍）
4. 蛋白标准液：
10 mg/ml BSA蛋白溶液储液，将10mg BSA标准品溶于1mL水，室温稳定2小时，12,000g离心10min，—20℃保存6—8月，—80℃保存1年。
将10mg/ml蛋白溶液稀释至4.0mg/ml, 3.5mg/ml, 3.0mg/ml, 2.5mg/ml,2.0mg/ml, 1.5mg/ml, 1.0mg/ml, 0.5mg/ml。12,000g离心10min后小量分装，—20℃保存6—8月，—80℃保存1年。
5．稀释液：待测样品的溶剂。小量分装，—20℃保存。
6．待测样品（12,000g离心10min ）

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