【极限体验】9种甜味剂、防腐剂的检测方法

9种甜味剂、防腐剂的检测方法

摘要：

“民以食为天”，食品安全日益受到民众的关注。国家在《食品添加剂使用卫生标准》中严格规定了食品中各添加剂的添加种类和添加量，但现在任有为了个人利益违法添加非法添加剂或超标添加的事件时有发生。甜味剂是赋予食品或饲料以甜味的食物添加剂，安赛蜜和糖精钠为最为常用的添加剂。防腐剂为抑制微生物生长繁殖，防止食品腐败变质的添加剂，苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、对羟基苯甲酸酯类防腐剂在食品中最为常用，对人体健康产生一定影响。为防患食品安全问题，要求仪器行业提高仪器检测能力，寻找各种快速检测方法。

实验部分

原理

通过萃取法-HPLC检测法同时测定蜂蜜样品中安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸正丁酯9种甜味剂和防腐剂的分析方法，采用紫外检测器，检测波长为240nm。萃取方法简单，HPLC检测结果准确，具有良好的标准曲线线性、重复性以及检测结果，该法可在23min内完成全部物质的检测。

仪器

高效液相色谱仪（配二元高压梯度洗脱装置、紫外检测器）

试剂及标样

甲醇（色谱纯）

无水乙醇：优级醇

乙酸铵缓冲液：0.02mol/L

盐酸溶液：0.03mol/L

安赛蜜（1mg/mL）

糖精钠（1mg/mL）

苯甲酸（1mg/mL）

山梨酸（1mg/mL）

脱氢乙酸（≥99.0%）

对羟基苯甲酸甲酯（≥99.0%）

对羟基苯甲酸乙酯（≥99.0%）

对羟基苯甲酸丙酯（≥99.0%）

对羟基苯甲酸正丁酯（≥99.0%）

标样配制和样品处理

1.标准溶液配制

分别准确称取0.1g脱氢乙酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸正丁酯（精确到0.001g），甲醇稀释至浓度为1mg/mL作为标准储备液。准确、等量量取安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸正丁酯标准储备液，用甲醇稀释配成100μg/mL的混合标准溶液，用甲醇：水溶液（5:5）逐级稀释混合标准溶液，制备浓度依次为0.1μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL、10μg/mL、50μg/mL、100μg/mL的标准溶液，液相色谱进样备用。

2.样品提取（主要针对蜂蜜）

称取试样约2.5g（精确至0.01g）于50mL烧杯中，依次加入2mL纯净水，1mL盐酸溶液，混匀，再加入20mL无水乙醇，用超声波清洗器提取10min；取出，用无水乙醇定容于50mL容量瓶至刻度，摇匀。取1mL溶液于离心管中，加入1mL纯净水，混匀，用0.45μm的滤膜过滤，供液相色谱仪测定。

色谱条件

色谱柱：Xtimate C18（4.6mm X 250 mm，5μm）

检测波长：240nm

流速：1.0ml/min

柱温：35℃

进样量：20ul

流动相：流动相A：甲醇，流动相B：乙酸铵缓冲溶液（0.02mol/L）

梯度表：

依次将浓度为0.1μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL、10μg/mL、50μg/mL、100μg/mL的标准溶液注入高效液相色谱系统中进行检测，根据样品浓度和峰面积计算甜味剂、防腐剂各标准品的标准曲线及线性系数。其中线性系数分别为安赛蜜 R²=0.99957，糖精钠R²=0.99991，苯甲酸R²=0.99992，山梨酸R²=0.99995，脱氢乙酸R²=0.99975，对羟基苯甲酸甲酯R²=0.99963，对羟基苯甲酸乙酯R²=0.99986，对羟基苯甲酸丙酯R²=0.99984，对羟基苯甲酸正丁酯R²=0.99989。

标样色谱图：

出峰顺序为：1-安赛蜜、2-糖精钠、3-苯甲酸、4-山梨酸、5-脱氢乙酸、6-对羟基苯甲酸甲酯、7-对羟基苯甲酸乙酯、8-对羟基苯甲酸丙酯、9-对羟基苯甲酸正丁酯

某种蜂蜜样品色谱图：

计算

将安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸正丁酯9种标准品的混合溶液分别进入色谱检测，根据出峰时间定性，峰面积定量，外标法计算。

结论

萃取方法简单，HPLC检测结果准确，具有良好的标准曲线线性、重复性、分离度，检出限低，检测时间短，可在23min内完成全部物质的检测。