HPLC法同时测定龙蛋泻肝丸中三种活性成分含量

wangshirf

2012/12/30

私聊

液相色谱（LC）

龙胆泻肝丸含龙胆草、黄芩、栀子、泽泻、木通、车前子、生地、当归、柴胡、甘草诸药。方中龙胆草上泻肝胆实火，下清下焦湿热，为君药。黄芩、栀子苦寒，有清热燥湿、导热下行之效，为臣药。泽泻、木通、车前子清热利湿，可使湿热从小便而解。生地、当归有滋阴养血之功。柴胡有疏肝解郁和引经之用。甘草调和诸药。龙胆泻肝丸泻肝而不伤肝，利湿而不伤阴，其配伍相辅相成，疗效为医家和患者所称道。该药除用于高血压、急性眼结膜炎、急性中耳炎、急性胆囊炎、急性盆腔炎、尿路感染、外生殖器感染等症的治疗以外，现在也常用于乙型病毒性肝炎及其他一些慢性病的治疗。本文建立了龙胆泻肝丸中三种有效成分含量测定的方法，以期为龙胆泻肝丸质量控制提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津LC-20AT高效液相色谱仪，SPD-M20A检测器， LCsolution色谱工作站， Metteler AB265S（0.01mg）；Sartorius BS124S（0.1mg）超声处理仪（江苏昆山超声仪器厂）

1.2 试药 龙胆苦苷、栀子苷、黄芩苷苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号111640-200503）；甲醇为色谱纯，磷酸为分析纯，水为纯化水。龙胆泻肝丸市场购买）

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件与图谱

色谱柱: Kromasil C₁₈柱（4.6mmx250mm，5um）；检测波长：240nm；流速：1.0ml.min^-1；流动相：甲醇-0.2%磷酸酸；柱温：35℃。按以下梯度进行洗脱。

梯度洗脱	时间（分钟）	甲醇(A%)	0.2%H₃PO₄(B%)
	0～25	20	80
	25～30	20～43	80～57
	30～50	43	57

2.2 溶液制备

2.2.1对照品溶液

精密称取龙胆苦苷对照品 10.15 mg置25 ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为标准品溶液S1；精密称取栀子苷对照品 10.07 mg置25 ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为标准品溶液S2；精密称取黄芩苷对照品 11.03 mg置100 ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；精密吸取对照品溶液S1、S2各 1 ml,置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，制成每1ml含龙胆苦苷39.34 ug 和栀子苷40.28 ug的溶液；

2.2.2供试品溶液

取本品，研细，取约 0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入加入甲醇 25 ml，称定重量，超声处理（功率250W，频率33KHZ）超声处理 20 分钟，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液,即得。。

2.3 线性关系考察

精密量取对照品储备液2、4、6、8、10、20、μl，按上述色谱条件，记录色谱图，测定峰面积。以黄芩苷面积为纵坐标，黄芩苷进样量为横坐标（ug），得回归方程：Y=1502524.5660X-14062.7967，相关系数r=1.0000（n=6）,结果表明马钱苷在0.4212～4.212μg 范围内呈线性关系。

2.4精密度试验

取供试品溶液20μl，连续进样5次，记录色谱图，计算峰面积。峰面积分别为2518120.5、2537227.4、2515180.5、2535679.3、2560168.7，平均面积为2533275.3，RSD%=0.7%

2.5 稳定性试验

取供试品溶液，在0、0.5、1、2、4、6、8、12h分别进样测试，记录色谱图。结果供试品溶液在12小时内稳定性良好，峰面积的RSD为0.68%。

2.6 回收试验

取同一批龙胆泻肝丸碎混匀，约取0.5g6份，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入对照品储备液5ml照含量测定项下的方法制备，精密加入甲醇20ml，超声30分钟使溶解，用0.45μm的微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液。按上述色谱条件进样测定，用回归方程计算回收率。见表1

表1 回收率试验结果

取样量样品中含加入黄芩苷实测黄苷回收率平均 RSD

(g) 黄芩苷量（mg）量（mg）（mg）（%）（%）（%）

0.28821.2140 1.053 2.2333 96.8

0.28491.2004 1.053 2.2481 99.5

0.2807 1.1827 1.053 2.2494 101.3 98.93 1.6

0.2892 1.2184 1.053 2.2451 97.5

0.2902 1.2225 1.053 2.2576 98.3

0.2880 1.2134 1.053 2.2685 100.2