前几天做了个实验,测API-4000的信噪比,定量和定性重复性
过程如下:
将2ppb利血平标准溶液(100%乙腈溶解)经色谱柱(5um,2.1mm*150mm)注入质谱(MRM模式,通道为609.3→195.2,去簇电压DP为140V,碰撞能量CE为48eV,扫描时间200ms),进样体积为25uL(国标规定总的进样量为50pg),流动相为80%乙腈+20%甲酸水(甲酸0.05%),流速为0.5mL/min,重复测定6次,将色谱峰峰高/基线峰高的比值作为信噪比结果,定量和定性重复性通过峰面积和保留时间的重复性来考察。
但在实验过程中,遇到了几个问题,请大家帮忙看一下,谢谢!
1.测定信噪比的时候,发现实测信噪比只有100左右(色谱峰高3500,基线峰高为30左右,如下图所示),虽然高于国标要求的30:1,但与仪器介绍的性能差很多,人家可是说1pg的利血平MRM模式进样信噪比大于300:1,咱50pg的进样量信噪比只有100:1,虽然是买的二手的,但灵敏度完全不是一个数量级的。
原因也想了几个,一个是峰宽有0.4-0.5min,如果峰宽缩短一点,信噪比应该会改善很多,最好的方法是换小粒径的UPLC柱,但是目前仪器上的连的Peek管是那种透明软管耐压不够,之前试过把一根Eclipse短柱(1.8um,2.1mm*5mm)接上去过,但压力一直呈规律性上升,每秒20-25psi的波动幅度非常均匀,最后到达一个临界点就漏泄了;
第二个原因可能是连接色谱柱和质谱的管路内径太大了,估计有0.05-0.10inch,大概1.25-2.5mm,这样分离的组分在柱后又很容易发生扩散,进而造成峰变宽;
第三个原因可能和扫描时间设置有关系,API-4000的扫描速率比较坑爹,印象里只有2400u/s,通道的扫描时间设了200ms,但是峰形不好,有很多尖锐的点,以前用Agilent 7000 gc-QQQ扫描时间设50ms做低浓度的物质峰形都比较平滑的,难道扫描时间要设长点吗?
2.在测定量和定性重复性时,连进6针,发现每一针的保留时间都不一样,如下图所示,想了半天找不到原因,流动相为80%乙腈+20%甲酸水(甲酸0.05%),流速为0.5mL/min,利血平在0.4-0.7分钟出峰,会不会是每一针间隔时间太短了(每针时间为2min),导致柱子未平衡好,导致保留时间迁移?
从图上看峰面积重复性倒是挺好的,但是在Analyst软件上咋找不到手动积分的选项?
问题比较多,请各位高手帮忙看一下,万分感谢啊!!!