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节后第一讨论贴--已知解离常数预测出峰顺序!

毛细管电泳(CE)

  • 假设用最简单的CZE模式分离以下氨基酸,用的是最简单的磷酸-硼酸缓冲溶液,pH为9.0,没有任何其他有机添加剂,请预测其出峰顺序。



    参与有奖,有附机理讨论的重赏!



    特别提醒:

    出峰顺序这东西,只能理论预测一下而已,实际上的顺序跟理论预测的有可能会千差万别。特别是当背景电解质比较复杂,有胶束有有机溶剂的时候,出峰顺序更是无法预测。


    另外,以上条件是我假想出来的,自己也没做过,如果按这个条件去做有可能得到的是一团峰,根本分不出来。之所以想要发这样的帖子,主要是想跟大家探讨一下溶液pH值与解离度和出峰顺序之间的关系。所以大家千万不要用这个条件做外参考哦,万一误导了大家的话那真的是伤不起了。
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  • nini2006

    第1楼2013/02/19

    忘记附分子量了。
    V: 117.15
    L: 131.17
    I: 131.17
    F: 165.19
    W: 204.23
    K: 146.19
    T: 119.12

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  • flysky97

    第2楼2013/02/21

    是不是很有难度?呵呵
    大家都不敢来发言呢……
    咱也回去好好考虑考虑再给答案……

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  • nini2006

    第3楼2013/02/21

    不难吧?就比较荷质比而已嘛。

    提示一下:R-COOH在这个pH下都成R-COO-,也就是带一个负电荷,剩下的就考虑R-NH2而而已了(pKa或pKb=pH是考察弱电解质在溶液中是否解离的分界点)。确定了电荷,再结合分子量,顺序就出来了。

    当然,还要考虑pI值,pH=pI值的时候整个物质呈电中性。因为羧基带负电,胺基带正电,正好中和了。

    flysky97(flysky97) 发表:是不是很有难度?呵呵
    大家都不敢来发言呢……
    咱也回去好好考虑考虑再给答案……

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  • flysky97

    第4楼2013/02/24

    对于赖氨酸pI>9.0 ,其他均<9.0 赖氨酸第一个出来;
    分子量由大到小(其倒数由小到大顺序)为:
    色W: 204.23
    苯F: 165.19
    赖K: 146.19
    亮L: 131.17=异亮I: 131.17
    苏T: 119.12
    缬V: 117.15

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  • flysky97

    第5楼2013/02/24

    我先猜一下顺序(不对莫怪):
    赖氨酸Lys
    色氨酸try
    苯丙Phe
    异亮氨酸iso
    亮氨酸leu
    苏氨酸thr
    缬氨酸val

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  • nini2006

    第6楼2013/02/24

    flysky果然专业哈,厉害!

    我这里可没有“标准答案哦”,过两天我再把我的顺序排出来看跟你的是否有出入。

    再等等看是否还有别的网友给出其他答案。

    flysky97(flysky97) 发表:我先猜一下顺序(不对莫怪):
    赖氨酸Lys
    色氨酸try
    苯丙Phe
    异亮氨酸iso
    亮氨酸leu
    苏氨酸thr
    缬氨酸val

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  • nini2006

    第7楼2013/03/15

    发现还是有版友关注了这个帖子的,可是就是没有人大胆站出来说想法。害羞?哈哈

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  • nini2006

    第8楼2013/03/15

    其实出峰顺序这东西,只能理论预测一下而已,实际上的顺序跟理论预测的有可能会千差万别。特别是当背景电解质比较复杂,有胶束有有机溶剂的时候,出峰顺序更是无法预测。
    另外,这个条件是我假想出来的,自己也没做过,如果按这个条件去做有可能得到的是一团峰,根本分不出来,所以大家千万不要用这个条件做外参考哦,万一误导了大家的话那真的是伤不起了。

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  • wy20071722

    第9楼2013/04/25

    这个东西我想可能跟质量的关系不大,应该主要跟阻力有关,因为如果力平衡的话,就跟质量没关系了。等电点不同,解离度不同。主要跟电荷和半径有关系。考虑解离度不同,顺序:


    异亮



    苯丙
    这个没有考虑和溶液缓冲离子的相互作用影响,像后面几个pH接近,特别像亮和异亮,可能分不开,不清楚他们之间分子大小和电动势的差异,有可能会出峰与预测相悖,但这样的话不相符的部分迁移时间应该是接近的。
    分离不同等电点的应该是用等电聚焦来做吧。

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  • nini2006

    第10楼2013/04/25

    1、毛细管电泳的基本分离原理就是根据荷质比不同而达到分离的呀,所以跟分子量有大关系的。

    2、按照CE分离的基本原理,亮氨酸和异亮氨酸是分不开的,但是实际上这两个物质还是比较容易分离的,因为他们是同分异构体而非手性物质,结构有差别。(该例子正好说明了CE分离机理的复杂性)

    3、分离氨基酸不需要等电聚焦,蛋白质才需要。氨基酸分离的最常用模式就是CZE和MEKC.。

    wy20071722(wy20071722) 发表:这个东西我想可能跟质量的关系不大,应该主要跟阻力有关,因为如果力平衡的话,就跟质量没关系了。等电点不同,解离度不同。主要跟电荷和半径有关系。考虑解离度不同,顺序:


    异亮



    苯丙
    这个没有考虑和溶液缓冲离子的相互作用影响,像后面几个pH接近,特别像亮和异亮,可能分不开,不清楚他们之间分子大小和电动势的差异,有可能会出峰与预测相悖,但这样的话不相符的部分迁移时间应该是接近的。
    分离不同等电点的应该是用等电聚焦来做吧。

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