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毛细管电泳无胶筛分PCR产物时遇到了问题

  • 我是向日葵
    2013/04/22
  • 私聊

毛细管电泳(CE)

  • 最近在做随机引物PCR产物的分离,用文献中的条件先分离DNA marker,分离marker时可以分离出想要的峰(峰有些宽),怎样可以改变峰型?在分离PCR产物时,虽有峰出现却和跑琼脂糖凝胶电泳时跑出的条带对应不上,找不到原因, 特来求助各位
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  • wy20071722

    第1楼2013/04/25

    换缓冲液体系和管子应该可以改变峰形,在可以的条件下可以增加电压;
    CE和琼脂糖凝胶应该是不一样的吧?

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  • 我是向日葵

    第2楼2013/04/26

    改变缓冲液的浓度可以吗? 管子已经换过了,没什么改变。跑样电压还真没改过,明天试一试。
    如果跑琼脂糖凝胶,我要的片段在300bp ,那跑CE的时候我要的片段应该和marker 300bp的片段在同一时间出峰 不是吗? 我做毛细管的时间不长,所以不大懂。

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  • nini2006

    第3楼2013/04/26

    没做过BGE。不过用这种模式分离前的毛细管是不是先要处理一下?比如毛细管内壁要先涂层以消除电渗流的影响同时防止吸附。涂层搞得好的话可能峰宽问题就可以解决了。

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  • ericwong

    第4楼2013/04/27

    即使是重复别人的实验,有时也需要对别人的条件进行优化的,不一定是照搬过来就可以用

    我是向日葵(v2715317) 发表:改变缓冲液的浓度可以吗? 管子已经换过了,没什么改变。跑样电压还真没改过,明天试一试。
    如果跑琼脂糖凝胶,我要的片段在300bp ,那跑CE的时候我要的片段应该和marker 300bp的片段在同一时间出峰 不是吗? 我做毛细管的时间不长,所以不大懂。

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  • 我是向日葵

    第5楼2013/04/27

    我们用的是动态涂层在缓冲液中加HPMC涂层。发现只有新配置的缓冲液才好用,如果放置了几天就做不出第一天的效果了。
    我们现在正在对条件进行优化。
    谢谢大家的宝贵意见~~~~~~

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  • nini2006

    第6楼2013/05/21

    溶液一般都是要新鲜配制的。如果想留稍微久一点就放冰箱里。

    我是向日葵(v2715317) 发表:我们用的是动态涂层在缓冲液中加HPMC涂层。发现只有新配置的缓冲液才好用,如果放置了几天就做不出第一天的效果了。
    我们现在正在对条件进行优化。
    谢谢大家的宝贵意见~~~~~~

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