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常规反相色谱柱安装及使用维护指南

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2013/04/23

化学药检测

何谓常规反相色谱柱?
那些在硅胶或杂化基质颗粒上键合了如C18、C8、C4 或苯基等键合相的色谱填料所装填的色谱柱, 按反相色谱条件进行操作和分离。
新色谱柱开启和安装的推荐步骤:
1. 使用新鲜洁净的水与乙腈，冲洗系统, 确保系统干净。
2. 取用色谱柱时避免磕碰掉落。
3. 将色谱柱入口端连接到系统上, 柱出口端先不要连接,色谱柱身上有箭头标明正确流向。
4. 在0.1mL/min 流速条件下用纯乙腈润洗色谱柱, 然后在2 分钟内将流速升至0.5mL/min。
5. 当溶剂均匀的从柱出口端流出, 停流速, 将色谱柱出口端接到系统检测器上( 可避免气泡进入流通池)。
6. 重启流速, 按照步骤4 的方法逐渐提高流速至所需。
7. 参考柱效测试报告中的方法测试柱效。柱效结果略低于柱效测试报告属正常情况。如结果明显偏低、峰形拖尾, 提示色谱柱和/ 或所使用的液相系统处于非理想状态, 需要进行故障排查。
当使用2.1mm 内径色谱柱时, 建议优化系统以减少谱带展宽, 并确保管路与色谱柱连接恰当、无死体积。

进行实际样品分析的推荐步骤:
1. 确保流动相洁净, 每隔24-48 小时就应新配水相流动相,并同时更换或仔细清洗流动相溶剂瓶, 以避免长菌。
2. 确保样品不含颗粒型杂质。如样品过脏, 或有微粒存在,需要考虑适合的样品制备方法。在使用样品过滤器时,确保滤膜与样品溶剂完全兼容( 不发生溶解)。也可考虑使用高速离心法去除颗粒性杂质。
3. 确保样品溶液与流动相条件兼容, 进样后不会发生沉淀、或溶剂不互溶情况。
4. 如系统在线混合生成流动相, 预先检查流动相各组分的兼容性。
5. 了解色谱柱的操作使用限度。可使用保护柱以延长柱寿命。
6. 在使用流动相进行柱平衡之前, 如果流动相中含有可能析出的缓冲盐, 先使用5 倍柱体积的有机溶剂- 水溶液进行过渡。
7. 在常规分析过程中, 每针或间隔若干针清洗柱内可能积累的污染物。
8. 在色谱柱使用过程中, 定期进行柱效测试, 记录塔板数与压力, 从而追踪监控色谱柱的性能变化。
9. 反相色谱柱应保存于合适的高比例或100% 有机相( 如乙腈或甲醇) 中。如色谱柱使用于高温或极端PH 条件,或停用色谱柱超过72 小时, 用100% 乙腈保存色谱柱。
10. 使用原配的柱堵头, 确保堵头拧紧以避免柱内溶剂挥发。取放色谱柱时避免磕碰掉落。

柱清洗与再生的推荐步骤:
压力升高, 色谱柱峰形发生变化如出现严重拖尾、肩峰甚至峰分岔, 分离度降低, 这些都强烈提示色谱柱受到污染。可采用以下步骤处理:
1. 如系统接有在线过滤器和保护柱, 首先排查在线过滤器与保护柱, 进行更新替换。
2. 使用高比例的有机溶剂进行冲洗（有缓冲盐时先洗盐）。可低流速过夜清洗，通常能够洗去大部分污染物。
3. 如有机溶剂清洗不能解决问题, 可采用如下方法进行色谱柱的清洗和再生。根据样品性质以及你所了解的污染物性质选择清洗方法, 用20 倍柱体积（即, 对于4.6x250mm 柱, 相当于80mL）的HPLC 级溶剂清洗色谱柱,将流动相温度升至35-55℃可提高清洗效率。

分
该帖子已被版主-加3积分，加2经验;加分理由:你终于出手了影子，多发点好贴吧

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影子

第1楼2013/04/23

你在实际操作过程中是不是有很多与上述不一样的？欢迎讨论

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xiaowang268

第2楼2013/04/24

1-5的操作都是差不多的

0

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