宝刀未老，古木发新枝，米格列奈钙有关物质方法学部分

东风恶

2013/05/03

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前言：米格列奈钙片（Mitiglinide Calcium Hydrate Tablets）主要由米格列奈钙组成，其化学名：双〔（2s）-2-苄基-3- (顺-六氢异吲哚-2-羰基)丙酸〕单钙二水合物。本品可以单独用于经饮食和运动疗法不能有效控制高血糖的Ⅱ型糖尿病病人。米格列奈是继瑞格列奈、那格列奈后第三个美格列脲类药物，是苯丙氨酸的衍生物。

米格列奈钙片的原料药有本公司自己生产，其质控指标之一：有关物质的两个已知杂质，及（2S）-2-苯甲基丁二酸对照品和杂质C。

此色谱柱（序列号：W10212097）在上篇文章中已经宣布退役，后来因色谱柱紧缺，摸索条件后启用了。

以前的色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.05mol/L磷酸盐溶液(用0.05mol/L磷酸二氢钾溶液调节0.05mol/L磷酸氢二钠溶液pH值至7.0)-甲醇(40:60)为流动相；检测波长为290nm；柱温30℃。理论板数按雷贝拉唑钠峰计算不低于1000，雷贝拉唑钠峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。

现在的色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.01mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH值至3.0）(45:55)为流动相；检测波长210 nm。理论板数按米格列奈钙峰计算应不低于2000。

试验步骤：取本品，加甲醇制成每1ml中含1.0mg的溶液，作为供试品溶液；另精密量取含量测定项下的对照品溶液适量，用甲醇稀释制成每1ml中约含2μg的溶液，作为对照溶液。取有关物质（2S）-2-苯甲基丁二酸对照品和杂质C对照品适量，用供试品溶液溶解并稀释制成每1ml中含米格列奈钙为1mg和有关物质对照品为5μg的溶液，作为系统适用性试验溶液。照含量测定项下的色谱条件，取对照溶液20μl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的10%～20%；取系统适用性试验溶液20μl，注人液相色谱仪，理论板数按米格列奈峰计箅不低于3000，米格列奈峰与有关物质对照品峰的分离度应符合要求。精密量取供试品溶液与对照品溶液各20μl，分别注人液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2.5倍。

其主要色谱图加下：

系统适用性试验色谱图

供试液样品色谱图：

3.2.S.4.3.2.5检测限与定量限(色谱图见附件63～70)

精密称取对照品10.49mg置10ml量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试储备液，取供试储备液用甲醇逐级稀释，分别取20µl注入高效液相色谱仪，经测定，米格列奈钙主峰保留时间约为12.5分钟，在±1分钟的时间范围计算基线噪音约为361μV，当S/N≒3时,检测浓度为0.5245μg/ml,检测限为10.49ng,当S/N≒10时,定量限浓度为2.0980μg/ml,定量限为41.96ng,试验结果见下表。

检测限的确定

序号	峰高（μV）Δε	检测限（μV）
1	361	1083

检测限验证浓度

名称	浓度(µg/ml)	进样量（ng）	峰高（µV）	平均峰高（µV）	S/N
供试液1	10.4900	209.8	19799	19799	54.8
供试液-2	0.5245	10.49	1396	1382	3.8
供试液-2-1	0.5245	10.49	1463
供试液-2-2	0.5245	10.49	1287
供试液-3	2.0980	41.96	3944	3939	10.9
供试液-3-1	2.0980	41.96	3882
供试液-3-2	2.0980	41.96	3990

3.2.S.4.3.2.6进样精密度试验(色谱图见附件71～76)

精密称取本品10.41mg，置10ml量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液20μl注入液相色谱仪中，记录色谱图，结果见下表。

1%自身对照溶液精密度试验结果

项目	1	2	3	4	5	6	平均值	RSD
峰面积	497236	497861	511754	511185	497288	499997	502553	1.4%
保留时间	12.862	12.830	12.826	12.821	12.818	12.821	12.830	0.13%

进样精密度试验结果表明，1%自身对照溶液进样峰面积和保留时间精密度RSD均小于2.0%，能满足本品有关物质检查要求。

3.2.S.4.3.2.7 溶液稳定性试验(色谱图见附件77～81)

精密称取本品10.41mg，置10ml量瓶中，加甲醇适量溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液在室温放置8小时，分别在0、2、4、6、8小时，精密量取上述溶液各20µl，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见下表。

溶液稳定性试验结果

时间（h）	0	2	4	6	8	平均值	RSD
主峰面积	38639318	38254191	38700652	38376283	38467089	38487507	0.47%
归一化含量（%）	99.908	99.883	99.884	99.891	99.892	99.892	0.01%
杂质个数	4	5	4	4	4	-	-

溶液稳定性试验结果表明，本品在流动相溶液中室温放置8小时稳定性较好，主峰面积的RSD值为0.47%，归一化含量RSD值为0.01%，均小于2.0%，杂质个数无明显变化，本品的流动相溶液较稳定。

讨论：

一根色谱柱也许在某个色谱条件下，不能使用了，但是在另外色谱条件下，能使用，这种情况下，其柱填料流失不严重，如键合硅胶相损坏程度较轻。以前的流动相为：0.05mol/L磷酸盐溶液(用0.05mol/L磷酸二氢钾溶液调节0.05mol/L磷酸氢二钠溶液pH值至7.0)-甲醇(40:60)，现在为：乙腈-0.01mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH值至3.0）(45:55)。因为时间较紧，故没有用其他新色谱柱进行对比。能满足拟订标准就放行了。

精
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xiaoxu

第1楼2013/05/03

东风原创期待补充学习ing

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东风恶

第2楼2013/05/03

网页字体搞的我不知如何下手了。
xiaoxu(xufangdan) 发表:东风原创期待补充学习ing

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xiaoxu

第3楼2013/05/03

看效果这个退役的柱子还是可以发挥余热的

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东风恶

第4楼2013/05/03

缺点就是杂质C的理论板数较低，分离度还可以。
xiaoxu(xufangdan) 发表:看效果这个退役的柱子还是可以发挥余热的

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御风飘逝

第5楼2013/05/03

理论塔板数定为2000，是不是有点低呢。现在随便一根色谱柱的塔板数也应该在六七千吧，好的估计可以上万的了。

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东风恶

第6楼2013/05/03

我们是参照人家的一个标准，一般情况下都能达到4000以上。
御风飘逝(yuanrui82) 发表:理论塔板数定为2000，是不是有点低呢。现在随便一根色谱柱的塔板数也应该在六七千吧，好的估计可以上万的了。

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御风飘逝

第7楼2013/05/03

那这个标准在制订的时候，是直接照搬人家的2000好一些，还是提到到3000，或者4000好一些呢你觉得？
东风恶(luoleqc) 发表:我们是参照人家的一个标准，一般情况下都能达到4000以上。

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samanthalas

第8楼2013/05/03

东风恶版友使用的是月旭公司的"优谱"系列色谱柱, 在月旭公司的四大系列色谱柱里面, 柱效算是最低的.

东风恶版友以后可以试试"极限"系列柱子, 柱效非常高, 性价比也好.
东风恶(luoleqc) 发表:缺点就是杂质C的理论板数较低，分离度还可以。