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紧急求助!毛细管电泳方法的建立的思路是什么?

  • xiaoxin2809
    2013/05/14
  • 私聊

毛细管电泳(CE)

  • 是这样,我虽做过一点点毛细管,但是已经有现成方法了,从没考虑过建立一个新方法的思路是什么。明天就答辩了,我怕有人提问这个问题,所以特来请教。

    举个例子吧,我们在做液相时会根据被分离物质的性质,包括极性,沸点,溶解性等性质选择分离条件和检测器(甚至包括长柱子还是短柱子),那么毛细管电泳从什么方向去考虑?该如何选择呢?
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  • nini2006

    第1楼2013/05/14

    我敢打包票不会有人提这样的问题的。不过你如果真要较真,可以从一下几方面去考虑:
    1、缓冲溶液。通电过程中为控制稳定的pH值,需要有缓冲液作为介质。那么这个介质需要有一定的离子强度和合适的缓冲容量才能使物质达到很好的分离。所以需要优化它的pH值和浓度。至于缓冲溶液的类型选择,无非就是磷酸,tris,硼酸等。这几种各有优缺,能控制的pH范围也不一样,就看你需要选择什么样的pH范围了。

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  • nini2006

    第2楼2013/05/14

    2、有时候光考虑缓冲溶液解决不了问题,分析物不能达到很好的分离,所以需要加入有机溶剂(organic additives)。常用的有机溶剂有甲醇、乙醇、乙腈等、丙酮等。时间多的话可以逐一比较。
    3、还是不行,就需要再加比如环糊精之类的。
    4、或者加入SDS以形成胶束,进一步改进分离
    5、依次类推,所以衍生出了那么多的分离种类

    ……

    祝你好运!

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  • ericwong

    第3楼2013/05/15

    其实也很简单,就是考虑不同物质的质荷比

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  • xiaoxin2809

    第4楼2013/05/18

    谢谢大师指教,学到了不少东西,虽然我没及时看到,第二天实验室就断网了,今天回家才上来。确实没人提问这样的问题,甚至都没有问我毛细管方面的,其它技术问了不少,不过蛮顺利的。但是作为知识我还是了解,特别是最近我发现这样一个现象,我们的毛细柱用的是永年的,内径50微米的,之前看过前两年一个师兄的论文,用的是75微米内径的柱子,我就产生疑问,难道柱子内径选择也是考虑在内的吗?后来问了一个在药厂的同学,她的回答很干脆,实验室有什么就用什么?是这样么?

    nini2006(nini2006) 发表:我敢打包票不会有人提这样的问题的。不过你如果真要较真,可以从一下几方面去考虑:
    1、缓冲溶液。通电过程中为控制稳定的pH值,需要有缓冲液作为介质。那么这个介质需要有一定的离子强度和合适的缓冲容量才能使物质达到很好的分离。所以需要优化它的pH值和浓度。至于缓冲溶液的类型选择,无非就是磷酸,tris,硼酸等。这几种各有优缺,能控制的pH范围也不一样,就看你需要选择什么样的pH范围了。

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  • nini2006

    第5楼2013/05/19

    一般情况下差不多就是你同学说的那样吧。只是不同内径分离条件也就不同。

    xiaoxin2809(xiaoxin2809) 发表:谢谢大师指教,学到了不少东西,虽然我没及时看到,第二天实验室就断网了,今天回家才上来。确实没人提问这样的问题,甚至都没有问我毛细管方面的,其它技术问了不少,不过蛮顺利的。但是作为知识我还是了解,特别是最近我发现这样一个现象,我们的毛细柱用的是永年的,内径50微米的,之前看过前两年一个师兄的论文,用的是75微米内径的柱子,我就产生疑问,难道柱子内径选择也是考虑在内的吗?后来问了一个在药厂的同学,她的回答很干脆,实验室有什么就用什么?是这样么?

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  • ericwong

    第6楼2013/05/22

    一般都会是这样,除非一定要重复别人的实验。
    不过使用不同内径的毛细管所得到的分离情况也会有不同

    xiaoxin2809(xiaoxin2809) 发表:谢谢大师指教,学到了不少东西,虽然我没及时看到,第二天实验室就断网了,今天回家才上来。确实没人提问这样的问题,甚至都没有问我毛细管方面的,其它技术问了不少,不过蛮顺利的。但是作为知识我还是了解,特别是最近我发现这样一个现象,我们的毛细柱用的是永年的,内径50微米的,之前看过前两年一个师兄的论文,用的是75微米内径的柱子,我就产生疑问,难道柱子内径选择也是考虑在内的吗?后来问了一个在药厂的同学,她的回答很干脆,实验室有什么就用什么?是这样么?

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  • feng-xue

    第7楼2013/05/24

    内径不同确实效果不太一样。我用50微米内径的毛细管分离蛋白,就不出峰,怎么换条件就是不出峰,但是用75微米的毛细管就能有点峰。再者,我同学合成整体住,用的100微米内径的毛细管。内径跟需要分析的物质有关吧,内径越小蛋白质越容易吸附,硅羟基也少,电流也越小

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