宝刀未老，古木结硕果，米格列奈钙含量测定方法学部分

东风恶

2013/06/20

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继“宝刀未老，古木发新枝，米格列奈钙有关物质方法学部分”，进行的含量测定方法学研究。

项目：含量测定（3.2.P.5.2.8）

检查方法：照高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录Ⅴ D）测定

试验条件：

色谱柱（柱长：150mm，内径：4.6mm，填料：C18，填料粒径：5μm，序列号：W10212097）

UV检测器（检测波长：210nm）

流动相：乙腈-0.01mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH值至3.0）(45:55）

流速：1.0ml/min

运行时间：约12min

系统适用性：理论板数以米格列奈峰计算应不低于2000。

具体试验操作：取本品20片，精密称定，研细，取细粉适量（约相当于米格列奈钙25mg），精密称定，置250ml的量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，滤过，取续滤液作为供试品溶液，取20ml注入液相色谱仪，记录色谱图；另取米格列奈钙对照品适量，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。

计算公式：

标示量百分含量（%）=××100%

式中：C_s为对照品的浓度（mg/ml）；

A_t为供试液的主峰面积；

N_t为供试液的稀释倍数；

A_S为对照品溶液的主峰面积；

W为供试品取样量（mg）。

3.2.P.5.3.6含量测定（色谱图见附件936～1079）

3.2.P.5.3.6.1波长选择

本品含量测定检查波长为210nm，同有关物质检查项。

3.2.P.5.3.6.2流动相选择

本品含量测定流动相为乙腈-0.01mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH值至3.0）(45:55），同有关物质检查项。

3.2.P.5.3.6.3进样精密度试验(色谱图见附件936～941)

精密称取米格列奈钙对照品10.23mg，置100ml量瓶中，用甲醇适量振摇使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试液，取供试液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。试验结果见下表。

精密度试验结果

进针次数	1	2	3	4	5	6	RSD%
峰面积（A）	5471813	5472559	5466909	5467631	5460382	5454541	0.1
保留时间（min）	9.572	9.574	9.569	9.568	9.569	9.570	0.02

试验结果表明，连续测量6次，主峰保留时间和峰面积RSD%均小于2.0%，进样精密度符合要求。

3.2.P.5.3.6.4含量测定线性与范围试验(色谱图见附件942～948)

精密称取米格列奈钙对照品（含量：99.8%）25.63mg，置50ml量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0ml分别置于25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试液。取上述供试液各20µl注入液相色谱仪，记录色谱图。试验结果见下表。

线性关系试验结果

浓度（%）	20%	40%	60%	80%	100%	120%	140%
进样量（μg）	0.4093	0.8185	1.2278	1.6370	2.0463	2.4556	2.8648
峰面积（A）	1132367	2191899	3275104	4429247	5478567	6578017	7716665

3.2.P.5.3.6.5溶液稳定性试验(色谱图见附件949～953)

取本品（规格：5mg，批号：20121001）细粉0.1808g，置100ml量瓶中，用甲醇适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液在室温条件下放置8h，分别于0、2、4、6、8h取上述溶液各20µl注入液相色谱仪，记录色谱图。试验结果见下表。

溶液稳定性试验结果

放置时间（h）/峰面积
0	2	4	6	8	平均值	RSD%
5048969	5041146	5037646	5030029	5025916	5036741	0.2

本品的供试品溶液于室温条件下放置8个小时，测得主峰面积的RSD为0.2%，小于2.0%，试验结果表明本品的供试品溶液较稳定。

3.2.P.5.3.6.6回收率试验(色谱图见附件954～975)

按80%、100%、120%的份量，各精密称取米格列奈钙工作对照品（含量：99.8%）三份，按处方量加入混合辅料，混匀，分别置100ml量瓶中，分别用甲醇适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度各含米格列奈钙约为0.08mg/ml、0.10mg/ml、0.12mg/ml的供试品溶液，各取供试品溶液20µl注入液相色谱仪，记录色谱图。试验结果见下表。

回收率试验测定结果

标示量	加入量(g)	测得量(g)	回收率(%)	平均值（%）	RSD（%）
80%	8.20	8.13	99.1	99.8	1.1
	8.24	8.12	98.6
	8.10	7.97	98.4
100%	10.10	10.09	99.9
	10.09	9.99	99.0
	10.22	10.23	100.1
120%	12.07	12.20	101.1
	12.30	12.52	101.8
	12.08	12.10	100.2

试验结果表明，平均回收率为99.9%，在98.0%～102.0%范围内，n=9，RSD为1.1%，小于2.0%，回收率符合含量测定方法验证要求。

3.2.P.5.3.6.7重复性试验(色谱图见附件976～991)

精密称取本品（规格：5mg，批号：20121001）细粉6份，分别置100ml量瓶中，加甲醇适量振摇使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试液，取供试液20µl注入液相色谱仪，记录色谱图。试验结果见下表。

重复性试验结果（%）

1	2	3	4	5	6	平均值	RSD
96.93	96.71	96.89	96.69	96.79	96.83	96.8	0.1

试验结果表明，重复性试验结果RSD值为0.1%，小于2.0%，符合重复性试验要求。

3.2.P.5.3.6.8含量测定方法的确定

照高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录Ⅴ D）测定。

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.01mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH值至3.0）(45:55）为流动相；检测波长210 nm理论板数以米格列奈峰计算应不低于2000。

测定法取本品20片，精密称定，研细，取细粉适量（约相当于米格列奈钙25mg），精密称定，置250ml的量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，过滤，取续滤液作为供试品溶液，取20ml注入液相色谱仪，记录色谱图；另取米格列奈钙对照品适量，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。

3.2.P.5.3.6.9含量测定色谱条件耐用性

因本品有关物质检查项的色谱条件参照含量测定项，试验结果详见有关物质分析方法验证项3.2.P.5.3.2.9。

3.2.P.5.3.6.10含量测定结果(992～1007)

参照3.2.P.5.3.5.8项含量测定的方法，并结合本品含量测定结果，将本品含量限度拟定为：本品含米格列奈钙二水合物(C₁₉H₂₄NO₃)₂Ca•2H₂O应为标示量的90.0%～110.0%。本品自制样品和上市样品含量测定均符合规定，结果见下表。

试验结果

批号	测定结果（%）	含量测定色谱图编号	含量均匀度色谱图编号
20121001	98.9	992～999	1008～1031
20121101	99.2	1000～1003	1032～1055
20121102	98.4	1004～1007	1056～1079