1. 方法原理
试样用硫酸+混合催化剂（硫酸钾、硫酸铜）消化溶解后，铵离子在碱性条件下加热蒸馏，生成氨气并与水蒸汽经过冷凝后，被硼酸吸收生成硼酸铵。以溴甲酚绿+甲基红混合溶液为指示剂，用酸标准溶液自动滴定，根据标准酸消耗量可计算出氮、蛋白质的含量。化学反应过程如下：
（1）消化过程：消化过程为将含氮化合物和浓硫酸共热，将有机氮转化为无机氮硫酸铵：2NH2+H2SO4+2H+ (NH4)2 SO4（其中CuSO4做催化剂）。
（2）蒸馏过程：将消化完的样品转移到定氮仪蒸馏装置，加入过量的浓氢氧化钠，将NH4+转变成NH3，通过蒸馏把NH3驱入过量的硼酸溶液接受瓶内，硼酸接受氨后，形成四硼酸铵。
(NH4)2 SO4+2NaOH＝2NH3+2H2O+Na2SO4
2NH3+4H3BO3＝(NH4)2B4O7+5H2O。
（3）滴定过程：用标准酸滴定，直到硼酸溶液恢复原来的氢离子浓度
(NH4)2B4O7+2H++5H2O＝2NH4++4H3BO3。
2. 主要试剂及溶液
硫酸铵（优级纯），其他试剂为经确认的分析纯试剂，所用溶液按国标规定要求配制及标定。主要试剂如下配制：
40％氢氧化钠溶液：
2％硼酸溶液：
0.1000 mol/L的1/2硫酸标准溶液：
5%溴甲酚绿+1%甲基红混合指示剂（1∶1）：
混合催化剂（无水硫酸铜∶硫酸钾=50∶1000）：
3. 主要仪器及设备
主要仪器包括：全自动凯氏定氮仪（含300 mL定氮管，硼酸溶液、氢氧化钠溶液、盐酸标准溶液的专用桶）；定氮消解炉，万分之一分析天平。
4. 测定方法
样品制备：称取己制备的试样1.0 g（精确±0.1 mg）于消化管中，加入20 mL硫酸和20 g混合催化剂，于石墨消解炉上消化至溶液澄清透明后，定容至100 mL容量瓶中摇匀，分取10.0mL样液至定氮管中，参照仪器操作规程进行分析。
5. 测定条件选择
5.1消化时间的影响
称取同一化肥样品，在不同消化时间下进行样品消化，消化时间对测定结果的影响见表1。
由表1可以发现，消化时间过长会引起氨的损失；消化时间不够，消化不完全也会导致总氮量偏低。根据实验结果，样品消化时间为样品溶液沸腾后40 min ~ 60 min中最好。
5.2催化剂用量的影响
根据标准文献，混合催化剂（硫酸钾、硫酸铜）配比为1000 g∶50 g，但混合催化剂加入量对样品溶液消化有很大的影响，是消化成功的关键，它决定酸的沸点，也决定消化所需的时间。添加硫酸钾可以提高温度加快有机物分解，但硫酸钾量过大，沸点太高，生成的硫酸氢铵就分解放出氨，使氮损失。因此当硫酸过多的被消耗或样品中脂肪含量过高时，要增加硫酸的量。消化时热源的强度同迅速消化和完全氨化关系很大。称取制备好的化肥样品，加入相同的硫酸和不同混合催化剂用量，结果见表2。
表2结果表明，催化剂加入量对样品溶液消化有很大的影响，当催化剂用量在20 g ~ 30 g时，样品测定结果最高，因此，确定催化剂加入量为20 g。
6. 方法学考察
6.1 线性范围
选用纯度>99．9％的硫酸铵，将其在105 ℃的烘箱中烘2 h，然后使用万分之一天平准确称取0.005、0.01、0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30 g（精确至±0.0001g）加到含1.00 g的NaCl的10 mL水溶液中，溶解后在凯氏定氮仪上分别测定其氮含量，其氮含量理论值和实测值间线性关系见表3和图1。图1表明，该方法氮测定线性范围为1.1 % ~ 52.53%。如样品测定结果其氮含量大于52.52%，则须稀释后测定。
6.2 最小检出限
对20次空白值测定结果如表4所示，根据表4计算得，空白值的氮含量标准偏差S为0.0056%，方法最小检出限N含量（%）为4.6×S = 0.026%
6.3 仪器精密度
用纯度>99．9％的硫酸铵，将其在105℃的烘箱中烘2 h，然后使用万分之一天平准确称取0.1g（精确至±0.0001g），并用蒸馏水溶解，放在不同的定氮管中，在凯氏定氮仪上分别测试其氮含量。进样7次。结果见表5
6.4 仪器再现性
用纯度>99．9％的硫酸铵，将其在105℃的烘箱中烘2 h，然后使用万分之一天平准确称取0.1g（精确至±0.000 1g），并用蒸馏水溶解，放在不同的定氮管中，在凯氏定氮仪上分别测试其氮含量。多次实验结果见表6（不同时间进行的测定）。
6.5 回收率
称取制备好化肥样品7份按“4”项制备，测得氮的含量结果见表7，实验结果表明回收率在95.2％～102.9％，RSD为3.12%，说明本方法准确度较高。
7. 适用范围
该方法适用于化肥、糕点、肉及肉制品、乳饮料、大豆及其制品、花生、米中氮及蛋白质的测定。根据不同的样品氮换算为蛋白质的系数不同。
糕点、肉制品： 6.25
乳饮料： 6.38
大豆及其制品： 5.71
花生： 5.46
米： 5.95
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