HPLC-ELSD法测定酸枣仁制剂中酸枣仁皂苷A的含量

目的:建立HPLC-ELSD 检测酸枣仁制剂中酸枣仁皂苷a的含量方法。方法:采用Diamonsil C₁₈色谱柱以乙腈-水(25∶75) 为流动相;ELSD:流速1.0mL/min,ELSD漂移管温度110 ℃,载气(N2)流速2.8 L/min结果:酸枣仁皂苷A进样量在0.104～1.04μg范围内线性良好( r= 0.9998); 平均回收率为95.6%。结论:本法准确、灵敏、重复性好，为酸枣仁制剂的质量控制提供了依据。

1.仪器与试药

1.1仪器 安捷伦1100高效液相色谱色谱仪，Alltech 2000ES型蒸发光散射检测器，KQ250超声波清洗器（江苏昆山超声仪器厂），高速离心机（上海飞鸽）十万分之一分析天平（梅特勒公司）。

1.2试药桔梗药材：由市场购买提供。经鉴定符合2010版中国药典规定。对照品：酸枣仁皂苷对照品（购自中国食品药品鉴定研究院，批号：111851-201003）乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Diamonsil C₁₈色谱柱 (5um, 4.6*250mm)，流动相乙腈-水( 25：75) ，柱温30℃，流速1.0 mL·min ^{－ 1} ，进样量10μL;ELSD参数: ELSD漂移管温度110 ℃,载气(N2)流速2.8 L/min，理论板数按酸枣仁皂苷A峰计算应不低于3000。

2.2 对照品储备液

精密称取酸枣仁皂苷A对照品约10mg, 置100ml量瓶中，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.104mg的溶液，即得。

2.3供试品溶液

取本品粉末(过四号筛)约1g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)适量，加热回流4小时，弃去石油醚液，药渣挥去溶剂，转移至锥形瓶中，加入70％乙醇20ml，加热回流2小时，滤过，滤渣用70％乙醇5ml洗涤，合并洗液与滤液，回收溶剂至于，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4线性关系考察

精密量取项下对照品储备液0, 1, 2, 3,4mL, 分别置5 mL量瓶中, 用甲醇定容, 摇匀, 即得5个浓度的对照品溶液, 分别进样10μL, 测定峰面积积分值。以进样量(μg)的常用对数值X为横坐标, 峰面积积分值的常用对数值Y 为纵坐标, 进行线性回归, 回归方程为:Y= 1.291X + 3.036 r= 0.9998酸枣仁皂苷A进样量在0.104～1.04μg范围内线性关系良好。

2.5精密度

取2.2项下的对照品储备液适量, 用甲醇稀释成0.0104mg/mL的对照品溶液, 连续进样6次, 记录酸枣仁皂苷A的峰面积积分值, 计算RSD( n= 6)为0.32%, 表明精密度良好。

2.5重复性实验

取桔梗样品1共6份, 每份2g, 精密称定, 依2.3项下方法制备供试品溶液, 进样测定, 外标法计算酸枣仁皂苷A含量。结果样品中酸枣仁皂苷A含量平均值(n=6)为0.28%, RSD为1.5% , 表明方法的重复性良好。

2.6 稳定性实验

取样品的供试品溶液, 在本文色谱条件下, 每隔4 h进样1次, 共6次, 结果酸枣仁皂苷A峰面积积分值的RSD(n=6)为0.97% ,表明供试品溶液在24h内稳定。

2.7 加样回收率实验

取已测知酸枣仁皂苷A含量样品6份, 每份1g, 精密称定。分别加入0.0208 mg/mL的对照品溶液5 mL,依2.3项下方法制备供试溶液, 进样测定, 计算回收率。结果平均回收率(n=6)95.6%,RSD为1.8%。

2.8 样品测定

取不同来源桔梗样品, 依2.3项下方法制备供试品溶液, 在2.2项色谱条件下进样测定, 以外标法计算各样品中

含量。结果3批样品中酸枣仁皂苷A的含量分别为0.05%，0.04%，0.03%。