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ELISA试剂盒选购四大要点
hysw
2013/10/24
私聊
分析化学
1. 实验类型
ELISA试剂盒有多种类型,不过它们都有一个共同特点,就是进行抗原捕获。一般捕获形式包括将抗
原吸
附到微孔板或者用微孔板上的抗体进行捕获。In-cell ELISA和酶联免疫斑点ELISPOT是两种特殊的类型,In-cell ELISA需要将微孔板中培养的细胞进行固定和通透化,然后再用抗体原位检测。ELISPOT有点像蛋白印迹Western blot,先在带膜的微孔板中培养细胞,然后在膜上检测细胞分泌的抗原形成斑点。此外,我们还需要根据自身需要选择96孔板或是384孔板进行ELISA实验。
2. 抗体类型
单克隆抗体和多克隆抗体都能够用于ELISA,实际上有时候二者结合效果更好。例如,对于双抗夹心法而言,用多抗进行捕获而单抗进行检测有时更有帮助。多抗能够确保捕获所有抗原,随后单抗再特异性检测拥有特定抗原表位的抗原。
3. 交叉反应
如果抗体间发生冲突或交叉反应就会影响整个实验的特异性。其中抗体来源所带来的兼容性就是交叉反应的一个因素。尽管现在购买源自指定动物的抗体越来越容易,我们仍有必要确认一下是否会产生交叉反应的问题。在用双抗夹心法进行ELISA检测时,检测用的二抗必须特异性针对检测一抗,而不能与捕获抗体起反应。如果检测用二抗与捕获抗体结合,实验特异性就会大打折扣。通常我们选用源自不同宿主的捕获抗体和检测一抗,来避免上述问题。
4. 检测方式
如今检测ELISA有许多途径,我们可以根据自己的喜好进行选择。一般ELISA检测的是酶促反应的可溶性产物,抗体上结合有相应的酶(例如通常使用的辣根过氧化物酶HRP),而反应体系中添加有相应的底物。这种酶促反应生成具有特征性的颜色,可以通过分光光度计进行检测,碱性磷酸酶AP也是一种常用酶。酶可以结合在一抗上,也可以结合在二抗上,还可以使用链霉亲和素标记的酶与亲和素标记的一抗结合。此外ELISA的结果检测还包括放射性检测、荧光检测、化学发光或显色法检测等。
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平凡人
第1楼
2013/10/26
没接触过这种试剂盒,应该是医疗或食品上用到的。
0
发表回复
+关注
私聊
hysw
第2楼
2013/10/28
是做科研实验用的
平凡人(zhaoyt1979)
发表:
没接触过这种试剂盒,应该是医疗或食品上用到的。
0
发表回复
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