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大鼠白介素8ELISA试剂盒夹心法实验

hysw

2013/11/18

一、原理
采用两株识别不同表位的抗IL-8单克隆抗体，其中一株(4D7)作为包被抗体，以识别和结合待检标本中的IL-8,另一株作为酶标抗体，与结合于包被抗体的IL-8的另一个表位结合并催化底物显色。
二、试剂器材
1. 试剂盒提供包被抗体、酶标抗体、标准品，底物(ABTS)、96孔elisa板。
2. 包被缓冲液、PBS、底物缓冲液配制同常规ELISA法。
三、操作步骤：
1. 包被：pH9.5 碳酸盐缓液稀释4D7单克隆抗体粗提γ球蛋白至1μg/ml,加入96孔板,100μl/孔，放4℃,36小时。
2. 封闭：0.1%吐温PBS(Buffer A)冲洗96孔板三次，加3%BSA Buffer A(Buffer B)200μl/孔，放37℃,1小时。
3. 加待检样品：Buffer A 冲洗96孔板三次，加待检样品及Buffer B 稀释的标准品100μl/孔，放37℃,3小时。
4. 加酶标抗体：Buffer A冲洗96孔板五次,3%PEG Buffer A稀释酶标抗体至1∶800，加入96孔板，100μl/孔，放37℃,1小时。
5. 显色：Buffer A冲洗96孔板五次，pH5.4柠檬酸缓冲液溶解底物(ABTS),0.2mg/ml,加3%H2O2,2μl/ml，加入96孔板，100μ/孔，室温下或37℃显色。
四、注意事项：
1. 待检标本如为血清，应采用一次性容器，血液采集后尽快(6小时以内)分离血清。
2. 封闭液或抗体稀释液应新鲜配制或冻存。

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平凡人

第1楼2013/11/19

操作还是比较复杂，没看到大鼠如何处理的。

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