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实时荧光原理
会师楼
2013/12/01
私聊
PCR
荧光定量
PCR
原理
荧光定量
PCR
最早称TaqMan
PCR
,后来也叫Real-Time
PCR
,是美国PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术。该技术是在常规
PCR
基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料来实现其定量功能的。其原理:随着
PCR
反应的进行,
PCR
反应产物不断累计,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一个荧光强度信号,这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图。
一般而言,荧光扩增曲线可以分成三个阶段:荧光背景信号阶段,荧光信号指数扩增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段,扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖,无法判断产物量的变化。而在平台期,扩增产物已不再呈指数级的增加,
PCR
的终产物量与起始模板量之间没有线性关系,根据最终的
PCR
产物量也不能计算出起始 DNA 拷贝数。只有在荧光信号指数扩增阶段,
PCR
产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系,我们可以选择在这个阶段进行定量分析。为了定量和比较的方便,在实时荧光定量
PCR
技术中引入了两个非常重要的概念:荧光阈值和 CT值(如下图所示)。
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2014/12/21
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会师楼
第2楼
2014/12/21
欢迎常来。。
fkhjg(v2973219)
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学习学习了,
0
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