LC-MS/MS测定动物组织中10种β-内酰胺类抗生素残留

LC-MS/MS测定动物组织中10种β-内酰胺类抗生素残留

关键词：液相色谱串联质谱法；β-内酰胺类药物；动物组织

乙腈、甲醇：德国默克，色谱纯；甲酸：色谱纯；氯化钠：分析纯；氢氧化钠：分析纯；磷酸二氢钾：分析纯；磷酸氢二钾：分析纯；固相萃取柱：艾杰尔PEP-2（500 mg/6mL）。标准品：购自DR公司。

0.1 mol/L氢氧化钠：称取４ｇ氢氧化钠，并用水稀释至1000ｍＬ。0.05mol/L 磷酸盐缓冲溶液（pH 8.5）。称取8.7 g磷酸氢二钾，超纯水溶解，稀释至1000ｍＬ，调节pH 至8.5±0.1。

标准储备溶液：分别称取约0.01 ｇ（精确至0.001 ｇ）标准品，分别用乙腈:水溶液（1+9）溶解定容至100 ｍＬ，此标准溶液浓度为约为100 ug/mL，置于-18℃冰箱避光保存。

1.1.2仪器和设备

高效液相色谱串联质谱仪（LC-MS/MS）：AB5500；电子天平（奥豪斯）；旋转蒸发器（东京理化）；离心机（贝克曼）；均质器（IKAT18）；旋涡混合器（德国IKA）；pH计(梅特勒)。

1.2测定步骤

1.2.1　提取

称取样品2.01 ｇ（精确至0.01 ｇ）于50 mL 离心管中，加入10 mL乙腈水溶液（9+1，体积比），涡旋混匀后在4000 ｒ／min下离心5 min，将上清液转移至另250 mL 鸡心瓶中，用玻棒捣碎离心管中的沉淀，加入10 mL乙腈水溶液（9+1，体积比），旋涡混合后，在4000 r/min下离心5 min，合并上清液，向鸡心瓶中加入4 mL饱和氯化钠溶液，防止旋蒸过程中样品起泡沫。将鸡心瓶于旋转蒸发器上（37 ℃水浴）蒸发除去乙腈。

1.2.2净化

向鸡心瓶中加入20 mL0.05 mol/L磷酸盐缓冲溶液（pH8.5），涡旋混匀1 min，用0.1 mol/L氢氧化钠溶液调节pH至8.5。将固相萃取小柱安装在固相萃取装置上，用前用5 mL甲醇，5 mL水，5 mL0.05 mol/L磷酸盐缓冲溶液（pH8.5）预处理，将提取液以1 mL/min的流速上样。用5 mL0.05mol/L磷酸盐缓冲溶液（pH8.5）淋洗，再用5 mL超纯水淋洗。抽干后用6 mL乙腈洗脱（速度控制在1 mL/min），洗脱液收集于10 mL玻璃试管中。将洗脱液于４５℃下氮气吹干，用乙腈水溶液（1+9）定容至1 mL。过0.22 um滤膜后，用液相色谱串联质谱测定。

1.3色谱-质谱条件

色谱柱：C18柱，100*2.1 mm，5 um（菲罗门）；流速：0.3 mL/min，流动相乙腈和1‰甲酸水梯度洗脱（见表1）

质谱条件：离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测。气帘气30；GS1/GS245/55；喷雾电压5500V；碰撞能量等参数应调节使质谱灵敏度达到最佳。

2. 结果与讨论

2.1质谱条件的优化

用ESI+离子扫描，根据化合物的性质确定喷雾电压、气流、碰撞能量等参数，使灵敏度达到最佳。（参数见表2）

3. 结论

本实验通过对样品处理、净化以及仪器条件的优化等处理，建立了内标法测定动物组织中10种β-内酰胺类抗生素残留的检测方法，回收率稳定，其准确率和精密度均能满足有关法规的要求。

参考文献：