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福利!!!GPC玻璃净化柱安装及测试

  • 温文尔雅
    2013/12/25
    药物分析
  • 私聊

前处理综合讨论

  • GPC玻璃净化柱安装及测试



    一、装柱


    1 玻璃柱双密封圈柱塞


    图2 璃柱底座和液体管路

      将图1密封活塞和图2玻璃柱底座及液路连接,如图3

    3 活塞和管路连接

      将图3连接好后插入玻璃柱,如图4,之后将密封圈锁紧,与玻璃壁挤压,密封完好。


    4活塞插入玻璃柱

      图5是装好的底座,图6是玻璃净化柱顶端可调节柱塞,带有很长的拉杆,方便调节活塞位置及柱内填料松紧度,由于填料粒径较大,所以柱压很小,新柱大约50Psi以内。


    图5 安装好的玻璃净化住底座


    图6 顶端柱塞

    1、密封圈密封度调节螺母;2、柱塞在玻璃柱内上下调节螺母;3、玻璃柱端头锁紧螺母。

    填料S-X3用乙酸乙酯环己烷(1:1)浸泡,用玻璃漏斗将填料导入玻璃柱,之后两端密封完好,分别有两根管路输送流动相。

    图7 装填好的玻璃柱

      玻璃柱填装好后接入GPC凝胶净化色谱系统,待柱内气泡排除之后,继续用乙酸乙酯环己烷(1:1)冲洗,直到紫外检测器基线相对稳定。

      小贴士:装填好的玻璃净化住准备测试,流路方向与装填方向相反,把填装过程底端翻转过来可以减小压力。

    二、分离度测试


    采用不同分子量的标准品进行测试。大分子物质最先流出净化住,小分子最后流出。


    仪器:GPC600

    流动相:乙酸乙酯/环己烷 (1:1 )

    流速:5mL/min





    结论:以上图谱中四个组分均有很好的分离度,所以所装填的玻璃柱可以达到要求。

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  • 温文尔雅

    第1楼2013/12/25

    延伸与讨论

      装柱完成后,又开展了苏丹红和和2,4二硝基苯肼的分离实验。

      选用苏丹红I、II、III、IV和2,4二硝基苯肼进行混合,溶液呈砖红色,进行GPC净化。



    新装的玻璃柱连接GPC600进行分离


    分离过程

    实验条件



    仪器:GPC600

    流动相:乙酸乙酯/环己烷 (1:1 )

    流速:5mL/min




    问题来了:
    已知GPC凝胶净化色谱分离原理是利用凝胶孔的空间尺寸效应,所以大分子物质从凝胶颗粒四周经过因而走的路径较短,相反,小分子走的路径较长,所以溶质按分子大小依次流出。但上述试样中苏丹红分子量大于2,4二硝基苯肼,理论上是苏丹红先流出,而实验中却正相反,为何?求解释......

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  • 温文尔雅

    第2楼2013/12/25

    各位大神,版主,专家帮忙看看,支持下

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  • zl2008xz

    第3楼2013/12/29

    楼主手动型很强啊,玻璃净化柱原来可以这样制作,分离过程还可以看到,第一次看到,很不错,支持,记得之色谱可以分离胡萝卜素,楼主有兴趣可以做做看能分开吗,期待玻璃柱五颜六色的分离过程,做实验也很有趣吗!希望可以看到玻璃柱上分离的效果,太直观了,支持楼主啊!

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  • 透明

    第4楼2013/12/29

    安装步骤很详细,还有测试结果,不错

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  • 温文尔雅

    第5楼2013/12/30

    多谢支持!!!

    zl2008xz(zl2008xz) 发表:楼主手动型很强啊,玻璃净化柱原来可以这样制作,分离过程还可以看到,第一次看到,很不错,支持,记得之色谱可以分离胡萝卜素,楼主有兴趣可以做做看能分开吗,期待玻璃柱五颜六色的分离过程,做实验也很有趣吗!希望可以看到玻璃柱上分离的效果,太直观了,支持楼主啊!

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  • 温文尔雅

    第6楼2013/12/30

    还有延伸问题呢,难道没人遇到这种情况吗

    透明(zsj201204) 发表:安装步骤很详细,还有测试结果,不错

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  • 透明

    第7楼2013/12/31

    别的柱子也是这样?

    温文尔雅(v2760943) 发表:还有延伸问题呢,难道没人遇到这种情况吗

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  • 温文尔雅

    第8楼2014/01/02

    做了几遍都是这个出峰顺序

    透明(zsj201204) 发表:别的柱子也是这样?

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  • wulin321

    第9楼2014/01/03

    应助达人

    技术是需要不断学习摸索才能拥有

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  • 温文尔雅

    第10楼2014/01/10

    实践出真知

    wulin321(wulin321) 发表:技术是需要不断学习摸索才能拥有

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