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毛细管等点聚焦电泳样品峰缺失,什么原因?

毛细管电泳(CE)

  • 用贝克曼的毛细管电泳仪PA 800plus,做等电点测定实验,选用贝克曼Marker试剂盒中的7.0、5.5、4.1,测定的蛋白质理论等电点为4.8。

    结果不加样品的时候,Marker的3个峰很好并且线性也很好,但是加上样品之后,还是只有Marker的3个峰,没有样品对应的峰。想求助大家,这是什么原因?做了快一周了,都是只能跑出Marker,没有样品峰,

    换了另一个蛋白理论等电点为5.4,也是这种情况。找不到原因,希望大家赐教。。。
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  • nini2006

    第1楼2014/05/15

    是不是样品峰和marker峰没分开?你不加marker直接跑样品试试看情况如何。

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  • CEcret

    第2楼2014/05/15

    这种情况我遇到过几次,提供几点思路供你参考:

    1。你所测定的蛋白是否在280nm有明显吸收?有一些蛋白,如酪蛋白等,这个波长下没有吸收的

    2。你的样品浓度是否合适?如果你的样品蛋白浓度在5~10mg/mL,那么需要加入10uL左右每240uL。

    3。你的样品有没有脱盐?一般来说盐浓度一定要小于50mM。

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  • 君and

    第3楼2014/05/16

    嗯,混合在仪器跑了,即Marker7.0、55.、4.1和样品混在仪器跑了,只有3个Marker的峰

    nini2006(nini2006) 发表:是不是样品峰和marker峰没分开?你不加marker直接跑样品试试看情况如何。

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  • 君and

    第4楼2014/05/16

    哦,谢谢啦,我今天排查一下原因看看。

    CEcret(v2812644) 发表:这种情况我遇到过几次,提供几点思路供你参考:

    1。你所测定的蛋白是否在280nm有明显吸收?有一些蛋白,如酪蛋白等,这个波长下没有吸收的

    2。你的样品浓度是否合适?如果你的样品蛋白浓度在5~10mg/mL,那么需要加入10uL左右每240uL。

    3。你的样品有没有脱盐?一般来说盐浓度一定要小于50mM。

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  • 君and

    第5楼2014/05/16

    又出现新问题了,每一针样运行至聚焦之后开始分离时,就出现对话框The high voltage system was unable to deliver the required current,是什么原因啊?

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  • plssunyudong

    第6楼2014/05/16

    你的进样方式是什么,电动进样会导致淌度低的样品缺失,可以试试流体力学进样

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  • CEcret

    第7楼2014/05/17

    说明有漏电现象存在。。。

    检查一下你的毛细管有没有问题,如果没有问题,那么请清洗电极。做等电聚焦,由于采用的溶液里面polymer和尿素浓度都比较高,因此容易析出结晶,造成局部漏电。

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  • 君and

    第8楼2014/05/19

    进样方式是压力进样啊,25psi,99.9sec

    plssunyudong(plssunyudong) 发表:你的进样方式是什么,电动进样会导致淌度低的样品缺失,可以试试流体力学进样

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  • 君and

    第9楼2014/05/20

    谢谢,我昨天把待测蛋白的浓度加大到10mg/ml, 跑了一个不加等电点Marker的样品,有吸收峰,谢谢啦。

    君and(v2762911) 发表:哦,谢谢啦,我今天排查一下原因看看。

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  • 君and

    第10楼2014/05/20

    谢谢,我昨天把待测蛋白的浓度加大到10mg/ml, 跑了一个不加等电点Marker的样品,有吸收峰,谢谢啦。但是新的问题又来了,我用了三个Marker 7.0, 5.5, 4.1和目的蛋白放在一起进样,出现四个峰,我的目的蛋白理论等电点为4.8,应该是第3个峰,但是现在是第2个峰,是怎么回事啊?

    君and(v2762911) 发表:哦,谢谢啦,我今天排查一下原因看看。

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