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【分享】电化学发光免疫检测原理动态展示

化学发光

  • 电化学发光免疫测定(Electrochemiluminescence immunoassay,ECLI)是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定以后的新一代标记免疫测定技术,是电化学发光(ECL)和免疫测定相结合的产物。 它的标记物的发光原理与一般的化学发光(CL)不同,是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应,实际上包括了电化学和化学发光二个过程。ECL与CL的差异在于ECL是电启动发光反应,而CL是通过化合物混合启动发光反应。ECL 不仅可以应用于所有的免疫测定,而且还可用于DNA/RNA探针检测。

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  • wolf007_1

    第1楼2006/08/29

    其检测原理(以TSH检测为例):第一步:结合了活化的三联吡啶钌衍生物即[Ru(bpy)3]2+ + N羟基琥珀酰胺酯(NHS)的TSH抗体和结合了生物素的TSH抗体与待测血清同时加入一个反应杯中孵育9分钟。

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  • wolf007_1

    第2楼2006/08/29

    第二步:将被链霉亲和素包被的磁珠加入反应杯中,再次孵育9分钟,使生物素通过与亲和素的结合将磁珠、TSH抗体连接为一体,形成双抗体夹心法。

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  • wolf007_1

    第3楼2006/08/29

    下一步,蠕动泵将形成的 [Ru(bpy)3]2+-抗体-抗原-抗体-磁珠复合体吸入流动测量室,此时,磁珠被工作电极下面的磁铁吸附于电极表面。同时,游离的TSH抗体(与生物素结合的和与[Ru(bpy)3]2+结合的抗体)也被吸出测量室。

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  • wolf007_1

    第4楼2006/08/29

    紧接着,蠕动泵加入含三丙胺(TPA)的缓冲液,同时电极加电压,启动ECL反应过程。发光剂 [Ru(bpy)3]2+和电子供体TPA在阳极表面可同时各失去一个电子而发生氧化反应,使二价的[Ru(bpy)3]2+被氧化成三价,后者是一种强氧化剂;另一方面,TPA 被氧化成阳离子自由基TPA+●,后者很不稳定,可自发失去一个质子(H+),形成自由基TPA●,这是一种很强的还原剂,可将一个电子给三价的[Ru(bpy)3]3+,使其形成激发态的[Ru(bpy)3]2+,而TPA自身被氧化成二丙胺和丙醛。激发态的[Ru(bpy)3]2+通过荧光机制衰减,发射出一个波长620nm的光子,重新生成基态的[Ru(bpy)3]2+。该过程在电极表面周而复始地进行,产生许多光子,光电倍增管检测光强度,光强度与[Ru(bpy)3]2+的浓度呈线性关系,故可测出待测抗原的含量。


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  • wolf007_1

    第5楼2006/08/29

    最后,终止电压,移开磁珠,加入清洗液冲洗流动测量室,准备下一个样品测定。

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  • wolf007_1

    第6楼2006/08/29

    我晕啊,版主这么好的东东你都不给点奖励,55555555555555
    我吐血了~~~~~~~~~~~··

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  • wolf007_1

    第9楼2006/10/07

    楼上的什么意思?你有什么问题么?

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  • blue_icecream

    第10楼2006/10/18

    狂顶,这个方向不仅仅是化学发光的发展方向,也是分析化学和多学科交叉互融的发展方向(话可能说得大了哦,呵呵)楼主的信息非常好,而且我希望得到有关这方面更多的信息,不知道能否与楼主进行沟通?PPT非常棒,有没有完整的,并且配有文字解释说明的?
    我一直做的溶液水平的传统发光体系的化学发光,电化学发光没有涉猎,就是在一开始的学习和毕业论文的文献综述里知道皮毛而已.如果电化学发光可以做到这一点,那么用传统的化学发光能不能做该实验呢?工作太忙了很久没有刹下心来想一些问题了.满眼都是眼泪啊

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  • wolf007_1

    第12楼2007/02/09

    多谢楼上二位的厚爱,前一段时间一直比较忙,很多资料整理不出来,最近一直在整理资料,整理好以后一定上传,大家都是做这方面工作的,互相学习,共同进步!~~~~~

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