摸方法

先看看资料
【资料】实用HPLC方法的建立 ppt
http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20091107/2199122/

应助达人

可以先查阅相关资料，如果能找到相同或相似物质测定的方法，然后根据文献资料对色谱和前处理条件进行优化；如果没有相关资料，就需要根据物质性质进行摸索了

网上查的，一般也就含量方法能用，有关物质方法因为合成路线的不同而可能就不同。方法开发过程还真不是几句话几段话就能说清楚的，必须实践操作，成功开发几个不同类型的方法，同时掌握一些理论知识，才能总结经验，开阔视野。
最后，建议不要去网上找方法——除非实在弄不出来，这样从一开始就是自己的思路，才能最快的掌握方法开发的技巧。

含量方法就不说，相对简单一些。有关物质方法，需要找合成要到所有已知杂质的对照品和分子式，分析杂质的分子结构，看是否有特殊结构，如没有就用一般的流动相和梯度，配置杂质混合溶液（一般待测物正常浓度，杂质0.1-1%浓度），进样分析，如有必要每个杂质都进行定位；结果出来后，分析峰形、分离度和保留情况，再根据情况进行优化。如果有特殊的分子，比如强极性，这样可能一开始就需要尝试其他方法。
实际犯法开发过程，可能需要针对不同的情况，采取不同的对策，比如尝试调整分离度时，如果两个分离度不好的物质，保留时间已经有20min左右了，那么这时候调整梯度可能效果不好，如果它们是带有酸碱性的，那么调整流动相的pH可能有奇效；如果没有酸碱性，那么还可以尝试调整有机相种类以及色谱柱等。

哈哈，楼主你问的这个问题可以让专家写一本书了。。。

应助达人

大方面定下下来，小方面再慢慢琢磨。
大方面如：如样品的结构、极性，确定下用什么系统，反相或正相，流动相体系定下来，如离子对或一般试剂，这个过程中酸度值要考虑到。
小的方面如：色谱柱的选择，氨基柱、c18、c8，长柱子或短柱子。
这些也不是一次就能定下来的，还是要多次试验的，要不就不叫摸索了，很多教科书上面的玩意都重现不出来的。

应助达人

第一步先查文献呵呵

应助达人

摸方法的首先要根据你掌握的资料，先初步确定一个基础方法，然后对方法的各个方面逐一进行验证，通不过验证就改进，直到每一项都符合方法学要求。

最好确定的是检验波长，其次是流动相PH，在根据检测物的性质确定初始流动相，根据样品跑的情况来确定等度或者梯度，梯度的话还要试流动相的比例，柱子的话也要试，流速温度等就是最简单的了，比较好控，具体的给你分享一个资料，希望对你有用