准确检测乃实验第一位
牛膝为苋科植物,主要生长于河南,四川、湖南、江西、福建、广东、广西、四川、云南、贵州也有少量,是一种名贵中药材。
既有消炎、止痛、抗衰老、强筋骨、补肝肾之功效,亦有利尿通淋、逐瘀通经、引血下行、活血通经之疗效。用于治疗腰膝酸痛、筋骨无力、肿痛跌打、腰膝酸痛、咽喉损伤、痈肿恶疮、头痛、牙痛等病症。
药材名贵,检测方法也应该高档,下面我们就重点介绍下高效液相色谱法检测名贵中药材牛膝中β-蜕皮甾酮含量检测。
实验部分
原理
取适量本品粉末溶解、超声提取后,经进样器进入高效液相色谱系统,C18色谱柱分离,紫外检测器检测,保留时间定性,峰面积定量(外标法)计算。
仪器及试剂
仪器:高效液相色谱仪(紫外检测器+等度泵+柱温箱),电子天平,溶剂过滤器,超声波清洗器,三号筛(药典筛),具塞锥形瓶,25ml、5ml容量瓶若干,针筒式过滤器等。
试剂:甲醇(色谱纯),甲酸(分析纯),正丁醇,超纯水。
样品配制
对照品溶液的制备:准确称取β-蜕皮甾酮对照品2.5mg于25ml容量瓶中,加甲醇至刻度,配制成每0.1mg/1ml的β-蜕皮甾酮对照品溶液,备用。
供试品溶液的制备:取牛膝药材适量粉碎过三号筛(药典筛),准确称取本品粉末lg,置于具塞锥形瓶中,加水饱和正丁醇30ml,密塞,浸泡过夜,超声处理30分钟,滤过,用适量甲醇分数次洗涤容器及残渣,合并滤液和洗涤液,旋转蒸发仪蒸干,残渣加甲醇使溶解,转移至5ml容量瓶中,加甲醇至刻度,溶解、摇匀,0.45um微膜滤过,待测。
色谱条件
检测器:紫外检测器
色谱柱:Venusil XBP C18(4.6 X 250mm,5ul)
V9520525CK0043
检测波长:250nm
流动相:乙腈:水:甲酸=16:84:0.1(V:V)
流速:1.0ml/min
柱温:室温
进样量:10ul
对照品色谱图:
六针对照品色谱图对比:
重叠图: 平铺图:
对照品稀释200倍色谱图:
供试品色谱图:
六针供试品色谱图对比:
重叠图: 平铺图:
对照品、供试品色谱图对比:
重叠图:
平铺图:
样品做了不少,效果也还不错。
实验可以说明一切,那就是该检测准确、可靠,该方法适合牛膝药材中β-蜕皮甾酮含量检测。
值得注意地是前处理需要注意:一是超声提取处理尽量彻底,也就是超声波清洗器功率和频率适当大一点,超声的时间可以适当的长一点,超声波中可以加一些温水;二是用甲醇洗涤容器及残渣尽量彻底,也就是洗涤次数尽量多些;三是蒸发干的残渣加甲醇尽量完全溶解后全部转移。这样能尽量保证样品在前处理过程中的损坏,保证检测更准确。