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高效液相色谱怎样使用才算好

singlewhy

2014/11/15

液相色谱（LC）

高效液相色谱的使用和维护

随着现代化社会的不断进步和需求，科学技术的不断发展和提升，各种高尖端产品及技术如春雨后竹笋般蓬勃发展。高效液相色谱产品及高效液相色谱技术就是为了适应和满足这种社会需要悄然而生，并逐渐成长发展直至壮大起来。

作为先进、精密的仪器，高效液相色谱仪是用于尖端的科学研究，用于复杂的化学分析，用于关于民生问题的监测、检测等。仪器的正常运行，准确的结果数据是每个操作者所期待并向往的。那么仪器的正确使用和正确维护就显得尤为重要。

下面就一一介绍下高效液相色谱使用和维护中的几个重要环节吧。

实验前的准备工作

1. 过滤流动相。为了保证流动相洁净，流动相使用前都必须微膜过滤。

2. 流动相脱气。为了避免流动相中气泡对仪器（气泡可能会对仪器及相关设备的正常使用及寿命产生一定影响）及分析结果的影响。

3. 运行液相泵前尽量先清洗泵柱塞部件。清洗液一般采用10%甲醇溶液，也有采用10%异丙醇溶液（5%甲醇或异丙醇等有机相溶液能避免微生物污染，但浓度不能太高，高于20%缓冲液可能会导致盐结晶析出，碰到酸碱类物质可能会有比较强烈的反应；另外异丙醇粘度较大，清洗能力较强；也有采用纯水清洗的，这样如果仪器每天使用还行，如果长期不用，为了防止微生物繁殖，纯水还得用含有有机相的清洗液置换出去）冲洗，这是为了保护泵柱塞和密封圈等部件在泵运行时不被结晶盐等磨损而导致泵头漏液。

4. 每天运行仪器前先排气。一般的液相色谱仪都有排气功能，没有的可以不接色谱柱开机运行几分钟排气。

5. 泵运行时尽量不采用大流量模式（主要是换流动相或排气泡等，流量尽量设为3.0ml/min以内，这样更有利于保护泵柱塞杆和密封圈等部件的寿命）。

6. 分析前先对色谱系统（整个流路）进行冲洗及平衡，尤其是色谱柱。先用纯甲醇冲洗30分钟，再换10%甲醇水溶液冲洗30分钟，最后换含缓冲盐或酸碱类物质的流动相平衡30分钟。色谱柱如果长期没用，每一步冲洗、平衡量尽量为色谱柱柱容量20倍以上）。如果流动相中不含缓冲盐或酸碱类物质，纯甲醇冲洗完可直接换为流动相。使用色谱柱前知道或怀疑色谱柱中残留有或酸碱盐类物质，在用纯甲醇冲洗前增加一步10%甲醇水溶液冲洗。

7. 如果色谱柱需要控温（升温），要先运行泵后再设柱温箱温度。

8. 待仪器运行稳定后（基线基本走平后，这个是经验值），方可进样。

样品前处理

1.样品浓度不要太大，杂质不要太多，否则色谱柱处理起来压力很大。

2.进样前样品一定得先经微膜（一般采用0.22um或0.45um微膜）过滤。

实验过程中注意事项

1.为了避免进样器残留影响，进样前先对进样器进行清洗（这个不是必须的，但最好是每进一针样品或标准品前都清洗进样器和进样针，当然同一样品也可以不洗，不同样品尽量洗），清洗顺序为纯水、甲醇、流动相。

2.每进一针样品后要对系统进行一次冲洗、平衡后再进下一针样品（等度要求不高，梯度要求相对高，主要是冲洗色谱柱中残留的强保留物质）。

实验完毕的后续工作

1.做完样要先清洗进样器，清洗顺序为纯水、甲醇。

2.关闭柱温箱温度设置。

3.冲洗色谱系统及色谱柱。先用10%甲醇水溶液冲洗30分钟后换为纯甲醇冲洗30分钟，待基线基本走平停泵。如果流动相中不含缓冲盐或酸碱类物质，冲洗时流动相可直接换为纯甲醇。色谱柱用完后如果长时间内不会再用，纯甲醇冲洗量要大于色谱柱柱容量20倍以上的，冲洗后卸下，两端密封保存。

4.待色谱柱温度降至接近于室温时再停泵、关机（这一点需特别注意，目的是防止温度过高损坏色谱柱）。

5.关机前用清洗液清洗柱塞杆。

仪器长时间不用的维护方法

1. 如果长时间不做实验要经常开启下仪器，最好是半个月到一个月开启一次。

2. 仪器内要充满甲醇保护（或者用高纯氮气吹干液路中的液体后密封液路两端）。

3. 色谱柱最好卸下，两端密封保存，并堵上拆下色谱柱两端的管路。

4. 要保证实验室清洁、干燥、通风，无强光照射，无腐蚀性气体，无强烈振动等。

仪器好具有分析结果准确，分析时间短，故障率低，使用寿命长等多种优势。正确使用和维护，仪器就会长期保持良好的状态和性能，使用起来就会既顺手又准确，所以对仪器的正确使用和正确维护的重要程度不言而喻，这个不用说大家都知道，那是重要加非常的。

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相关话题

夏天的雪

第1楼2014/11/15

应助达人

“每进一针样品后要对系统进行一次清洗”如何清洗？这样做是不是就不能批量进样了？

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夏天的雪

第2楼2014/11/15

应助达人

进样前进行洗针程序，需要每进一针都这样清洗吗

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singlewhy

第3楼2014/11/15

是冲洗，等度要求不严，梯度要求相对高，主要是冲洗色谱柱中残留的强保留物质
夏天的雪(bingwang228) 发表:“每进一针样品后要对系统进行一次清洗”如何清洗？这样做是不是就不能批量进样了？

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该帖子已被版主-夏天的雪加10积分，加2经验;加分理由:原创补分，欢迎原创

singlewhy

第4楼2014/11/15

也不是必须的，但最好是这样洗，当然同一样品也可以不洗，不同样品尽量洗
夏天的雪(bingwang228) 发表:进样前进行洗针程序，需要每进一针都这样清洗吗

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我是风儿

第5楼2014/11/15

应助达人

谢谢楼主的总结

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夏天的雪

第6楼2014/11/15

应助达人

梯度每针走完平衡色谱柱很重要
singlewhy(singlewhy) 发表:是冲洗，等度要求不严，梯度要求相对高，主要是冲洗色谱柱中残留的强保留物质

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houjjun

第7楼2014/11/15

仪器使用和维护的内容，很好，很全

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langyabeilei

第8楼2014/11/17

应助达人

不错,wonderful

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浪淘沙隐

第9楼2014/11/17

我们以前的公司，由于有些管路是使用纯水相的，所以要求每半月使用10%异丙醇冲洗管路。另外还要求每月使用50%异丙醇冲洗系统。这样做下来，仪器状态确实很好，很少会出问题。

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夏天的雪

第10楼2014/11/17

应助达人

使用纯水的管路可以与有机相交换着用
浪淘沙隐(zhoujin83) 发表:我们以前的公司，由于有些管路是使用纯水相的，所以要求每半月使用10%异丙醇冲洗管路。另外还要求每月使用50%异丙醇冲洗系统。这样做下来，仪器状态确实很好，很少会出问题。

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