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【许愿原创】和尚头也能高效液相色谱法检测

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  • 和尚头也能高效液相色谱法检测

    和尚头,一种中药名称,又名续断,是川续断科多年生草本植物川续断的根。该药物具有“续折接骨”功效,因而得名续断。

    续断具有很多药物疗效,其中安胎补肝肾定经络生新血瘀血强筋健体、止痛续骨药效明显。可治咳嗽咳血胎漏遗精跌打损伤金疮痔漏痈疡、多种妇科疾病等。

    这个药品有点意思吧,下面介绍下这种药品高效液相色谱法检测,更有意思,要往下看哦。

    实验原理

    取适量粉末样品甲醇溶解,超声提取等处理后,由进样器进入高效液相色谱系统,经C18色谱柱分离,紫外检测器检测,保留时间定性,峰面积定量(外标法)计算。

    仪器及试剂

    仪器:高效液相色谱仪(紫外检测器+等度泵+柱温箱+进样器+C18色谱柱),超声波清洗仪,溶剂过滤器,电子天平,粉碎装置等。

    试剂甲醇(色谱纯)、乙腈(色谱纯)、超纯水等。

    样品制备

    对照品溶液制备精密称取川续断皂苷Ⅵ对照品50mg于25ml容量瓶中,加甲醇至刻度,配制成2mg/m1川续断皂苷Ⅵ对照品储备液。精密量取储备液0.75ml,置10ml容量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,配制成0.15mg/m1川续断皂苷Ⅵ对照品溶液,备用

    供试品溶液制备精密称取和尚头细粉样品0.5g具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减的重量,摇匀,0.45um微膜滤过,精密量取滤液5ml,置50ml容量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,待测

    色谱条件

    检测器:紫外检测器
    色谱柱:PromosilC184.6 X 250mm,5μm色谱柱
    S/N:P9510525CIL0835

    流动相:乙腈:水=30:70(V:V)

    检测波长:212 nm

    流速:1.0 mL/min

    柱温:30℃

    进样量:20μl

    对照品色谱图:



    供试品色谱图:



    以上是药典方法检测结果,效果还行,只是检测时间略长,下面我们就调整下色谱条件,具体如下。

    先改变下色谱柱温度,改为40℃,其它条件不变,结果如下:

    对照品色谱图:



    供试品色谱图:


    再改变下流动相,乙腈:水=40:60(V:V),其它条件不变,结果如下:

    对照品色谱图:


    供试品色谱图:


    最后换一根色谱柱,pGrandsil-STC-C18色谱柱,4.6 X 150mm,5μm,其它条件不变,结果如下:

    对照品色谱图:



    供试品色谱图:



    从以上色谱图可以看出,以上四种方法,检测和尚头样品中川续断皂苷Ⅵ含量效果都不错,都较准确、快速,都可以作为该样品的检测方法。但优化色谱条件后的效果更好些,尤其是更换更理想的色谱柱这种方法,效果最为明显。其优点在于色谱峰形更好;峰更窄、更高,检出限更低;检测时间更短;成本更低(短的色谱柱更便宜,流动相费用也相对低);系统压力低,系统适应性更好等,这种方法更适合该样品检测。

    总之优化色谱峰形,提高方法灵敏度,缩短检测时间方法很多种,以上我们通过升高色谱柱温度,增加流动相中有机相含量,更换更理想的色谱柱已验证了方法的可行性,另外增加高压泵流速,也会起到以上效果,但这样对色谱柱损坏较大,一般情况下不采用。有时检测高含量样品时我们还可以降低样品含量,减少进样量,也可以达到优化色谱峰形、提高方法灵敏度等效果。当然提高检测效果方法还很多,不同样品,我们采用的方法也会不尽相同,面对具体样品,具体情况我们尽量选择一种最佳方式,以达到我们所期望的效果。

    本方法(及优化方法)只适合该样品检测,只供参考,切不可盲目效仿。

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  • 菜头

    第3楼2014/11/25

    (⊙o⊙)…
    我是被楼主的题目给忽悠进来的。。。。。

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  • ECHO007

    第4楼2014/11/25

    楼主的标题名很有吸引力,原来和尚头是种药物名。

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  • houjjun

    第5楼2014/11/25

    我看好的就是这个

    ECHO007(v2769262) 发表:楼主的标题名很有吸引力,原来和尚头是种药物名。

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  • houjjun

    第6楼2014/11/25

    影响测得大多都是大分子的

    dahua1981(dahua1981) 发表:理论上液相可以做所有样品

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  • houjjun

    第7楼2014/11/25

    这个题目有吸引力吧,我做这个的时候也是被名字吸引的

    菜头(laohutushen) 发表:(⊙o⊙)…
    我是被楼主的题目给忽悠进来的。。。。。

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  • ECHO007

    第8楼2014/11/26

    呵呵,内容也不错。

    houjjun(houjjun) 发表:我看好的就是这个

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