波谱及色谱联合应于小克银汉霉对氟比洛芬的生物转化作用研究

波谱及色谱联合应于小克银汉霉对氟比洛芬的生物转化作用研究

为了进一步减少对动物的测试过程，一些微生物如浮生真菌小克银汉霉和放线菌，已经证明对于外源性化合物的生物代谢方式类似于哺乳动物，早在30年前就有国外专家提出将微生物作为人体药物代谢的模型，虽然还有待进一步验证，但是微生物可以产生大量有用的药物中间代谢产物，他比从给药动物中分离这些化合物以及可能产生有毒物质或反应条件苛刻的的药物合成要可取的多。由于氟原子理想的化学性质（小的范德华半径，电负性，碳 - 氟键的强度），市场上大约25%的药物中含有氟原子。氟比洛芬〔（RS）-2-（2-氟-4-联苯基）丙酸〕就是一个这样的例子，它是一种非甾体抗炎药（NSAID），治疗关节炎引起的炎症。在人体它被代谢成Ⅰ相代谢产物4-羟基氟比洛芬，3,4-2羟基氟比洛芬，3-羟基-4-甲氧基氟比洛芬，以及葡萄糖酸和硫酸结合物（II期代谢产物）。在马的尿液中也检测到了羟基和甲氧基的代谢产物。尽管氟比洛芬药物应用普遍，但是对于其微生物的生物转化研究却很少。

材料与方法：

材料：

安捷伦高效液相、安捷伦气质联用仪、核磁共振波谱仪、旋转蒸发仪、恒温水浴锅、超声仪。

方法：

菌体在沙氏葡萄糖琼脂平板上在26℃下培养5天，然后均质化在100ml无菌生理盐水溶液中。均质浆接种在含有50ml新鲜沙氏葡萄糖肉汤的250ml锥形瓶中，28℃摇床孵育。将5mg的氟比洛芬溶解于20ul的二甲基甲酰胺中，72小时后加入到培养基中，继续培养5天，对照试验同样条件培养不加入的培养液。培养液冰浴超声10分钟，离心处理，上清液使用50ml的乙酸乙酯进行萃取，萃取液干燥

氟比洛芬代谢物的分析：

萃取物经Varian400-MHz核磁共振仪19F NMR谱表明氟比洛芬经三天培养后完全降解到为代谢产物。

代谢产物的分离使用安捷伦制备液相，配18 9.4mm× 25cm色谱柱(Agilent Technologies)，流动相采用20%至60％的乙腈进行梯度洗脱，流速4ml/min。

结果与讨论：

1、对小克银汉霉对氟比洛芬的生物转化途径进行了如下推到：

2、本实验中我们对小克银汉霉对于氟比洛芬的生物转化代谢产物通过核磁共振测定（NMR）的波谱，气相色谱 - 质谱（GC-MS）和高压液相色谱（HPLC）进行了分析鉴定。