微雨燕双飞
第2楼2014/12/29
接下来是提取和净化,步骤超级简单,做起来真是省力啊
2、提取
(1) 水样以0.45um滤膜除去悬浮物。
(2)取200 mL水样和100mLMcllvaine缓冲液*,混匀,准备净化。
*Mcllvaine缓冲液(pH 4.0):称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)27.6 g、柠檬酸(C6H8O7·H2O)12.9 g、乙二胺四乙酸二钠盐37.2 g,用水溶解后稀释并定容至1000 mL。
3、净化
ProElut PLS 150mg/6mL(Cat.#68004)
a活化: | 依次加入5 mL甲醇、5 mL水,流出液弃去; |
b上样: | 加入待净化液,流出液弃去; |
c淋洗: | 加入10 mL 水,流出液弃去,推干小柱; |
d洗脱: | 加入5 mL甲醇,收集流出液; |
e重新溶解: | 将流出液在35 ℃下减压蒸至近干,用流动相定容至1 mL,供HPLC分析。 |